輪狀病毒VP4抗原表位在VP6載體蛋白同一位點(diǎn)表達(dá)比較研究.pdf

1、輪狀病毒(RV)能夠引起人類、哺乳動(dòng)物類、禽類腹瀉，其中A組RV是引起嬰幼兒急性胃腸炎的主要病原體。完整的RV共有三層衣殼，其基因組包裹在同心衣殼蛋白組成的二十面體顆粒中，由11個(gè)分節(jié)段的雙鏈RNA組成。RVVP6蛋白位于病毒的中間層衣殼，既是病毒含量中最豐富的蛋白，也是RV的組抗原蛋白。VP6蛋白氨基酸序列具有高度保守性，并具有較強(qiáng)的抗原交叉反應(yīng)性;RV VP4和VP7是主要的中和抗體原蛋白。VP4蛋白在病毒外殼形成刺突樣結(jié)構(gòu)，能獨(dú)立

2、誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。目前上市的RV疫苗均為減毒活疫苗，這些疫苗雖有其優(yōu)勢(shì)，也有一定潛在的不足，開發(fā)安全有效的新型疫苗仍具有重要意義。
　　本研究選取VP4蛋白上具有高度保守性和抗原交叉反應(yīng)性的第296-313位和第381-401位氨基酸抗原表位進(jìn)行重組抗原表位嵌合蛋白研究。采用基因工程技術(shù)，成功構(gòu)建A組人RV TB-Chen株VP6載體蛋白，將上述兩個(gè)抗原表位分別插入VP6蛋白載體基因同一位點(diǎn)，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌（E.

3、coli）細(xì)胞中成功表達(dá)出兩個(gè)在VP6載體蛋白表面攜帶有VP4中和抗原表位的重組嵌合蛋白。表達(dá)的嵌合蛋白可與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng);可誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生特異性血清抗體;抗嵌合蛋白血清抗體可特異性識(shí)別載體蛋白VP6F，Wa株病毒的VP6和VP4蛋白，可中和Wa株病毒在MA104細(xì)胞上的感染性。結(jié)果表明，所構(gòu)建和表達(dá)的兩個(gè)以VP6為載體的VP4抗原表位嵌合蛋白具有較高抗原反應(yīng)性和免疫原性;嵌合蛋白攜帶的VP4抗原表位具有增強(qiáng)載體蛋白免疫原性作用。