豬瘟病毒慢性感染對(duì)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄的影響.pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的豬的高度接觸性、傳染性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大威脅和經(jīng)濟(jì)損失，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報(bào)告的法定傳染病之一。CSFV中等致病力毒株造成慢性感染，疫苗株能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。通過研究CSFV中等致病力毒株和疫苗株體外感染豬外周血單核細(xì)胞(PBMC)及人工感染實(shí)驗(yàn)用豬后，對(duì)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄

2、和表達(dá)的影響，系統(tǒng)分析CSFV中等致病力毒株感染及疫苗免疫對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響，為闡釋CSF慢性感染的機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 分別使用CSFV中等致病力毒株HeBHH1/95及HCLV體外感染PBMC，在24hpi、48hpi，運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)對(duì)白介素、趨化因子、毒性反應(yīng)相關(guān)分子、IL-1β轉(zhuǎn)換酶、粘附分子、抗病毒作用相關(guān)分子、干擾素及干擾素調(diào)控因子、細(xì)胞因子受體共59種免疫相關(guān)分子進(jìn)行全面測定。結(jié)果顯示：在24hpi，

3、HeBHH1/95感染引起9種細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，50種下調(diào)，MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-8、IL-6轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)(RQ>2.1)。IL-1α轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)最顯著(RQ=3.16)，IFN-α轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)最顯著(RQ=0.54)；HCLV感染引起9種細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，50種下調(diào)，MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-8、IL-10、TGF-β2轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)(RQ>2)。MCP-1轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)最顯著(RQ=3.0

4、2)，IFN-α轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)最顯著(RQ=0.447)。在48hpi，HeBHH1/95感染引起12種細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，TLR-4和IFN-α不變，45種下調(diào)，IL-1α、MCP-1、IL-8轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)最顯著(RQ>2)，IL-1α轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)最顯著(RO=2.75)，IL-12p35轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)最顯著(RQ=0.427)；HCLV感染引起12種細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，47種下調(diào)，MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-8轉(zhuǎn)錄水平

5、顯著上調(diào)(RQ>23)。IL-1α轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)最顯著(RQ=2.63)，TGF-R轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)最顯著(RQ=0.295)。HeBHH1/95與HCLV體外感染均能導(dǎo)致PBMC體外培養(yǎng)系免疫相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄水平變化，IL-1α、IL-1β、IL-8等炎性相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄水平均顯著升高，毒性反應(yīng)相關(guān)分子、IL-1β轉(zhuǎn)換酶、粘附分子類細(xì)胞因子均顯著下降，但在抗病毒因子轉(zhuǎn)錄改變機(jī)制上具有差異，如HCLV誘導(dǎo)Rantes上升，HeBHH/95則下調(diào)。綜上

6、所述，提示CSFV中等致病力毒株HeBHH1/95和HCLV體外感染24hpi和48hpi均可誘導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)，但在誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞抗病毒感染應(yīng)答機(jī)制上具有差異。
　　 將23頭實(shí)驗(yàn)用豬(60日齡)隨機(jī)分為攻毒組、疫苗組和對(duì)照組，定期采血(0 dpi、1 dpi、2dpi、5 dpi、7 dpi、9 dpi、12 dpi、16 dpi、20 dpi、23 dpi、28 dpi、30 dpi、35dpi、43 dpi)，采用qRT-P

7、CR技術(shù)、流式細(xì)胞儀和ELISA技術(shù)，檢測豬外周血中10種細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平、淋巴細(xì)胞亞群分析和豬瘟抗體水平。結(jié)果顯示：HeBHH1/95感染組實(shí)驗(yàn)豬存活43dpi以上，在感染過程中T淋巴細(xì)胞減少和免疫抑制是豬瘟慢性感染早期的臨床特征，具有直接殺傷能力的γδT細(xì)胞、殺傷性T細(xì)胞和輔助型T細(xì)胞的數(shù)量降低均開始于2dpi，而不具備直接殺傷能力的活化記憶T細(xì)胞數(shù)量的降低開始于9dpi。在HeBHH1/95感染后，所有檢測抗病毒因子(IL-1α、

8、IL-2、IL-4、IL-8、IFN-α、IFN-β、TNF、Mx1、PKR和OAS)均顯著上升。HCLV疫組在5-7dpi時(shí)淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量略有上升，在12dpi到達(dá)高峰，對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，而后逐漸下調(diào)并趨于穩(wěn)定。進(jìn)一步的流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示淋巴細(xì)胞數(shù)量的提升主要是由于輔助性T細(xì)胞數(shù)量的增多。在HCLV免疫組中，CSFV抗體開始呈現(xiàn)陽性(阻斷率>40％)出現(xiàn)在9-12dpi之間，在此期間IL-8轉(zhuǎn)錄水平大幅上調(diào)，這兩者

9、增長與抗體形成的相關(guān)性揭示了Th細(xì)胞通過增殖誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞成熟，誘導(dǎo)細(xì)胞因子表達(dá)產(chǎn)生特異性CSFV抗體，并形成免疫保護(hù)機(jī)制。
　　 綜上所述，通過對(duì)CSFV體外PBMC感染和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物CSFV慢性感染/免疫后的各免疫相關(guān)因子動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行全面研究，通過比較感染前/后和免疫前/后各指標(biāo)變化，分析了病毒在逃避宿主免疫過程和形成特異性抗體中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞及細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化，為探索細(xì)胞因子作用奠定的基礎(chǔ)，為闡述CSFV慢性感染和免疫的機(jī)