RNA干擾抑制馬桑內(nèi)酯誘導(dǎo)的鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞MDR1表達(dá)的研究.pdf

1、癲癇是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，而約1/3的患者是難治性癲癇。盡管近年來新型抗癲癇藥物不斷應(yīng)用于臨床，但難治性癲癇的治療并沒有明顯改觀。目前廣為關(guān)注的一個因素是血腦屏障和血腦脊液屏障的血管內(nèi)皮細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞等多重耐藥蛋白的過度表達(dá)。P-gP(P-glyc9protein)是多藥耐藥蛋白家族中重要一員，具有藥物泵的作用，它限制了抗癲癇藥物進(jìn)入腦內(nèi)，而且也使到達(dá)癇性神經(jīng)元及其周圍組織的藥物濃度降低，抗癲癇治療失敗。本試驗用siRNA-h

2、airpin表達(dá)載體p-SIREN shuttle質(zhì)粒轉(zhuǎn)染馬桑內(nèi)酯誘導(dǎo)的已表達(dá)P-gP蛋白的星形膠質(zhì)細(xì)胞，并檢測RNAi抑制MDRlmRNA和P-gp的表達(dá)以及耐藥的逆轉(zhuǎn)。 方法：用siRNA-hairpin表達(dá)載體p-SIREN shuttle質(zhì)粒轉(zhuǎn)染馬桑內(nèi)酯誘導(dǎo)的已表達(dá)多重耐藥蛋白的星形膠質(zhì)細(xì)胞。通過熒光定量PCR測定MDRlmRNA的量，免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測P-gp蛋白表達(dá)的變化，流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)P-gp蛋

3、白作用底物羅丹明蓄積外排的變化。 結(jié)果：我們建立了表達(dá)P-gp耐藥蛋白的星形膠質(zhì)細(xì)胞模型，并有效地將表達(dá)shRNA的pSIREN shuttle質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染該細(xì)胞模型。轉(zhuǎn)染后試驗組細(xì)胞MDRl mRNA水平被抑制達(dá)67.70％(p<0.01)，P-gp表達(dá)水平明顯低于對照組(P<0.01)，試驗組P-gp作用底物羅丹明的細(xì)胞外泵出率23.08％明顯低于對照組78.35％(p<0.01)。 結(jié)論：本實驗說明RNAi方法