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1、實驗?zāi)康?通過外源改變髓樣分化因子88(myeloiddifferentiation factor88,MyD88)的表達,明確其與紫杉醇耐藥的相關(guān)性,檢測MyD88對細胞生物學(xué)活性的影響。
實驗方法:通過在A2780/Taxol細胞中用特異性siRNA敲低和過表達MyD88后,利用real-time PCR和Western blot分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測MyD88的表達變化;CCK-8法檢測細胞轉(zhuǎn)染前后對紫杉醇耐
2、藥性的變化,Western Blot檢測磷酸化蛋白激酶B(pAkt),X-連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)以及多藥耐藥蛋白(MDR1)的表達變化,流式技術(shù)檢測MyD88對細胞周期和凋亡的影響。
實驗結(jié)果:敲低MyD88表達水平,耐藥細胞株A2780/Taxol對紫杉醇的耐藥性明顯降低(p<0.01),抗凋亡能力減弱(p<0.01),同時抑制pAkt通路的活性或抑制MDR1的表達后A2780/Taxol細胞的耐藥性也出現(xiàn)明顯下降
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