神經(jīng)干細胞紋狀體內(nèi)移植后的行為和功能研究.pdf

1、本文研究目的：研究神經(jīng)干細胞移植到成年大鼠紋狀體后，在宿主腦內(nèi)的存活、遷移、分化等行為，為腦內(nèi)細胞移植提供基礎(chǔ)實驗證據(jù)；探討神經(jīng)干細胞移植對PD模型動物的治療改善情況。 研究方法：實驗從E14胎鼠腦室下帶區(qū)(subventricularzone，SVZ)分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞。采用神經(jīng)球培養(yǎng)方法，獲得大量的細胞克隆。分別用抗Nestin抗體、抗NF抗體、抗GFAP抗體和抗CNP抗體，對培養(yǎng)的細胞進行干細胞特性和多分化潛能的免疫組織化

2、學鑒定。 原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞經(jīng)3次傳代培養(yǎng)之后，選擇生長狀態(tài)良好的神經(jīng)干細胞用AAV2-GFP感染標記，把帶有GFP標記的神經(jīng)干細胞移植到成年大鼠紋狀體中。于細胞移植后的45天、90天和120天時分別灌流固定實驗大鼠，對固定后的大腦進行矢狀冰凍切片，熒光顯微鏡下觀察并配合免疫組織化學方法，研究移植細胞在大鼠腦內(nèi)的存活、遷移、分化等行為。 向健康成年大鼠的前腦內(nèi)側(cè)束部位注射適量6-羥多巴胺(6-OHDA)，建立帕金森病的

3、大鼠模型，一個月后，用阿撲嗎啡誘導模型大鼠旋轉(zhuǎn)，符合行為學要求的視為PD模型建立。對成功建立帕金森病模型的大鼠，向其腦內(nèi)紋狀體部位進行神經(jīng)干細胞移植，研究神經(jīng)干細胞移植對PD模型大鼠的治療改善情況。 研究結(jié)果： (1)從E14胎鼠的SVZ部位分離得到的細胞具有增殖和形成神經(jīng)球的能力，神經(jīng)球表達Nestin，神經(jīng)球分化后的細胞分別對NF、GFAP、CNP具有免疫陽性反應。 (2)AAV2-GFP感染標記的神經(jīng)干細胞

4、在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)綠色熒光，分化后的GFP標記細胞從胞體到突起整個細胞都有綠色熒光標記。 (3)在神經(jīng)干細胞移植后的各時間點，宿主腦內(nèi)都有大量標記細胞存在。 (4)神經(jīng)干細胞移植后45天，細胞遷移表現(xiàn)出明顯的方向性。神經(jīng)干細胞移植后90天，多數(shù)細胞表現(xiàn)為朝向腹后側(cè)遷移，遷移出的最遠距離為1.0mm。神經(jīng)干細胞移植后120天，遷移的細胞主要表現(xiàn)為兩條遷移路線：一條細胞沿弧形路線向背后側(cè)遷移到達胼胝體下緣；另一條細胞向腹后側(cè)

5、遷移到達黑質(zhì)，并有細胞繞過或穿過黑質(zhì)。 (5)遷移進入一定腦區(qū)的神經(jīng)干細胞分化后具有βtubulinⅢ免疫陽性反應。 (6)6-羥基多巴胺注入大鼠前腦內(nèi)側(cè)束后一個月，能夠成功建立起帕金森病動物模型。 (7)神經(jīng)干細胞移植對帕金森病模型動物的行為有一定程度的改善。 研究結(jié)論： (1)E14胎鼠SVZ來源的神經(jīng)細胞具有增殖和自我更新能力，具有多向分化潛能，符合神經(jīng)干細胞的基本特性。 (2)AA