褪黑素對妊娠期豬黃體細胞孕酮分泌的調(diào)節(jié)作用及機制研究.pdf

1、褪黑素(melatonin)是一種伴隨晝夜節(jié)律變化而產(chǎn)生的神經(jīng)內(nèi)分泌胺類激素，主要由哺乳動物松果體和視網(wǎng)膜分泌產(chǎn)生。研究表明，褪黑素主要通過其膜受體(Melatoninreceptor，MR)發(fā)揮生物學作用，1998年IU PHAR會議將哺乳動物的褪黑素受體命名為MT1、MT2和MT3三種亞型。褪黑素在下丘腦和垂體水平調(diào)節(jié)動物生殖活動深受研究者的關注，近年來的研究發(fā)現(xiàn)，卵巢也是褪黑素直接作用的靶器官，褪黑素膜受體在卵巢各種組織廣泛分布，

2、對卵泡的發(fā)育、雌激素和孕酮的分泌都具有調(diào)節(jié)作用，但是這些研究多集中在人和鼠，對家畜的研究較少，尤其是褪黑素對家畜妊娠期黃體功能調(diào)節(jié)作用的研究未見報道。本研究擬選擇妊娠期母豬為研究對象，采用免疫組織化學染色、細胞間接免疫熒光、QRT-PCR以及western blotting等方法研究褪黑素膜受體在妊娠期豬黃體組織和體外培養(yǎng)豬黃體細胞中的分布定位、褪黑素對豬黃體細胞孕酮分泌的調(diào)節(jié)作用及機制。研究結果如下。
　　1.免疫組織化學染色結

3、果表明，MT1和MT2廣泛分布于妊娠期豬黃體組織，主要定位于黃體細胞。
　　2.細胞間接免疫熒光結果表明，MT1和MT2在體外培養(yǎng)的豬黃體細胞中大量分布。細胞活性試驗結果表明，生理濃度的褪黑素能顯著上調(diào)黃體細胞活性(p＜0.05)。
　　3.不同濃度梯度褪黑素處理黃體細胞24 h，結果表明，1 pg/mL、5 pg/mL、25 pg/mL、125 pg/mL和625 pg/mL的褪黑素都能顯著促進孕酮的分泌(p＜0.05），

4、且呈劑量依賴性。分別以25 pg/mL和125 pg/mL褪黑素處理黃體細胞0h、8h、16 h、24 h、32 h、40 h和48h后，結果表明，孕酮的分泌量與處理時間呈依賴性，且培養(yǎng)8h后的所有時間點孕酮的分泌量都顯著高于對照組(p＜0.05）。分別以25 pg/mL和125 pg/m褪黑素處理黃體細胞16h，同時以褪黑素膜受體抑制劑處理黃體細胞，結果發(fā)現(xiàn)，褪黑素對黃體細胞孕酮分泌的促進作用完全被阻斷。
　　4.分別以25 p

5、g/mL和125 pg/mL褪黑素處理黃體細胞16 h，QRT-PCR和westernblotting方法檢測褪黑素對孕酮合成過程中3種調(diào)節(jié)酶表達的影響。結果發(fā)現(xiàn)，褪黑素上調(diào)StAR和P450scc的表達，而對3β-HSD的表達沒有影響;膜受體抑制劑能阻斷褪黑素對StAR和P450scc表達的上調(diào)作用。
　　本研究證實了褪黑素膜受體MT1和MT2廣泛分布于妊娠期豬黃體組織，主要定位于黃體細胞，生理濃度的褪黑素能顯著上調(diào)黃體細胞活性