甘露糖結(jié)合凝集素對妊娠期糖尿病孕婦外周血單個核細胞炎癥因子調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：本實驗通過檢測實驗干預(yù)前GDM組和對照組血漿細胞因子（IL-1、IL-10和TNF-a）及蛋白（TLR4、NF-κB）的表達是否存在差異性；在此基礎(chǔ)上以1μg/ml LPS誘導(dǎo)建立GDM孕婦外周血單個核細胞的炎癥活化模型，建模成功后予不同濃度的重組MBL（0.1、0.5、1.0、2.0μg/ml）干預(yù)通過檢測細胞因子和蛋白的表達水平變化來探討其對孕婦單個核細胞的脂多糖Toll樣受體（Toll-receptor,TLR）4/核轉(zhuǎn)錄因

2、子-κB信號通路活性的調(diào)節(jié)作用，從而探討MBL在GDM炎癥損傷機制中的作用。
　　方法：嚴格消毒后取孕婦空腹肘靜脈血15 ml，采用密度梯度離心法分離收集血漿和單個核細胞，調(diào)單個核細胞6*106個/L分7組，其中1組用于和對照組進行各指標（細胞因子IL-1、IL-10、TNF-a和蛋白TLR4、NF-κB）比對，余6組予LPS和不同濃度的重組MBL（0.1、0.5、1.0、2.0μg/ml）處理分別標記為A組（未處理組）、B組（僅

3、LPS處理組）、C組（LPS+0.1μg/ml處理組）、D組（LPS+0.5μg/ml處理組）、E組（LPS+1.0μg/ml處理組）、F組（LPS+2.0μg/ml處理組），采用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme Llinked Immunosorbent Assay,ELISA）和蛋白印跡法（Western-Blot,WB）檢測各組血漿細胞因子（IL-1、IL-10和TNF-a）和細胞總蛋白（TLR4、NF-κB）的表達水平變化情況。數(shù)據(jù)

4、分析采用獨立樣本t檢驗、方差分析、LSD檢驗和Pearson相關(guān)分析檢驗方法。
　　結(jié)果：（1）GDM組血漿脂多糖水平高于對照組[(0.92±0.41)與(0.57±0.22) EU/ml,t=3.21]；MBL水平低于對照組[(254.4±123.4)與(424.8±150.4)μg/ml,t=-1.96]；IL-1和TNF-a水平均高于對照組[分別為(14.5±2.1)與(10.5±4.0) pg/ml,(5.72±0.99)

5、與(2.79±0.87) pg/ml，t值分別為-3.46和3.77]，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均<0.05）；IL-10與對照組比較無明顯差異[為(4.4±0.9)與(3.0±1.0) pg/ml,t=-4.37]，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P值≥0.05）。
　?。?）Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，GDM組中炎癥因子水平（ IL-1、IL-10和TNF-a）與脂多糖水平均正相關(guān)（r1=0.78,r2=0.81,r3=0.83, P

6、值均<0.05），與MBL水平呈負相關(guān)（r1=-0.71,r2=-0.51,r3=-0.68,P值均<0.05）；脂多糖與MBL水平呈負相關(guān)（r=-0.51,P<0.05）。
　?。?）GDM組與對照組孕婦單個核細胞基礎(chǔ)細胞總蛋白進行比較發(fā)現(xiàn)，GDM組外周血單個核細胞TLR4和NF-κB蛋白表達水平均高于對照組[分別為1.85±0.41與1.27±0.72,1.20±0.62與0.84±0.31，t值分別為-13.57和-7.19

7、，P值均<0.05]。（4）細胞培養(yǎng)結(jié)果顯示：采用脂多糖和不同濃度重組MBL干預(yù)后，實驗各組均與B組進行比較，其中與B組比較C組IL-1、IL-10、TNF-a水平及TLR4、NF-κB蛋白表達量[分別為（15.44±2.29）、（4.77±1.84）、（5.83±1.08） pg/ml及2.01±0.15、1.47±0.04]，隨著重組MBL濃度的增加，D組[分別為（13.37±1.34）、（3.13±1.71）、（4.23±1.71

8、） pg/ml及1.58±0.69、1.20±0.16]、E組[分別為(12.18±1.38)、(2.72±0.69)、(3.15±0.78) pg/ml及0.85±0.02、0.89±0.02]、F組[分別為（10.59±1.20）、（2.03±0.92）、（2.71±0.96） pg/ml及0.56±0.44、0.61±0.21]逐漸降低，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.妊娠期糖尿病孕婦血