Beagle犬血清中HS203的微量分析及初步藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、寡聚藻甘酸鉻鈉(HS203)是一種以抑制胰島淀粉樣蛋白(IAPP)沉積為作用靶點(diǎn),具有明顯改善胰島素抵抗作用的海洋寡糖化合物,有望開發(fā)成為一種新型的海洋抗2型糖尿病藥物。由于缺乏一種靈敏有效的微量分析方法,特別是適合于生物體內(nèi)微量樣品分析檢測的方法,HS203的藥代動(dòng)力學(xué)研究一直未取得突破性進(jìn)展。本論文分別采用柱前紫外衍生高效液相色譜、柱前熒光衍生高效液相色譜和柱后熒光衍生高效液相色譜三種策略對(duì)HS203的微量分析方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,

2、并成功測定了Beagle犬血清中HS203靜脈注射的藥時(shí)曲線和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　通過PMP紫外柱前衍生高效液相色譜法的分析,確定了HS203的最適降解條件為溫度為110℃,時(shí)間4 h,TFA濃度為2 mol/L;確定了以0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(Ph6.7):乙腈(83:17,V/V)為流動(dòng)相,在Eclipse XDB-C18色譜柱上進(jìn)行分離,降解后的HS203與內(nèi)源性干擾物質(zhì)能夠達(dá)到較好的分離效果。將此方法成功地用于B

3、eagle犬靜脈注射60 mg/kgHS203的藥代動(dòng)力學(xué)分析,并計(jì)算了各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),結(jié)果表明其藥時(shí)曲線符合二房室開放模型。
　　通過α-萘胺熒光柱前衍生高效液相色譜法的分析,確定了HS203水解為單糖后,在甲醇/冰乙酸=9:1體系中與2 mol/Lα-萘胺和1.2 mol/L氰基硼氫化鈉進(jìn)行衍生反應(yīng)可得到較好的熒光標(biāo)記效果,采用乙酸乙酯萃取3次后再進(jìn)行氮吹可有效去除剩余標(biāo)記試劑;Ex=291 nm,Em=440 nm為最佳波

4、長。確定了超濾離心方法為去除血清蛋白的方法,采用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(Ph6.7)-乙腈(83:17,V/V)為流動(dòng)相時(shí),降解后的HS203、內(nèi)標(biāo)GalA及血清中的Glc分離度較好,為HS203及其他海洋類寡糖藥物的分析奠定了基礎(chǔ)。
　　通過鹽酸胍熒光柱后衍生高效液相色譜法的分析,確定了柱后最佳衍生條件為:200 mmol/L鹽酸胍、0.5:mol/L氫氧化鈉及125℃的衍生溫度;采用50 mmol/L磷酸鹽緩沖液(Ph

5、6.7)-乙腈(83:17,V/V)為流動(dòng)相,在Shodex AsahipakGS-320 HQ色譜柱上進(jìn)行分離,HS203原型、內(nèi)標(biāo)GlcA及內(nèi)源性干擾物質(zhì)能夠達(dá)到很好的分離;以0.25 mol/L NaCl溶液進(jìn)行超濾離心分離,可有效去除內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾和提高HS203的回收率。該法成功地用于HS203血藥濃度分析及初步藥代動(dòng)力學(xué)研究,確定了該藥的藥代動(dòng)力學(xué)符合二房室開放模型,與紫外衍生液相分析方法結(jié)果相符。該方法靈敏度高、樣品用量

6、少、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度較好,操作簡單,檢測限可達(dá)0.2μg/Ml,高于HS203的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)銀染檢測方法。
　　本論文在對(duì)Beagle犬血清中HS203的微量分析方法進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上,分別建立了一種將HS203進(jìn)行降解后再進(jìn)行PMP衍生的微量分析方法和一種對(duì)HS203不經(jīng)降解,直接進(jìn)行色譜分離和在線檢測的柱后熒光衍生分析方法,并將兩種方法成功地應(yīng)用于Beagle犬中HS203的藥代動(dòng)力學(xué)分析。特別是建立的柱后熒光衍