Bin1b防御素調(diào)控細胞的差異蛋白組學研究.pdf

1、差異蛋白質(zhì)組學是目前蛋白質(zhì)組學研究的一種重要研究策略。它著重于篩選和鑒定不同種類或狀態(tài)下各樣本之間蛋白質(zhì)組的區(qū)別與變化，具有很強的可實現(xiàn)性。它可以確定與疾病相關(guān)的目標靶分子，為臨床診斷、病理研究、藥物篩選、新藥開發(fā)、新陳代謝研究等提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)。 Bin1b是抗菌肽的一種，抗菌肽是生物體內(nèi)天然存在的一類具有殺滅細菌和真菌等多種病原微生物的小肽。有些抗菌肽還具有殺滅病毒和癌細胞的作用，此外有些抗菌肽還具有促進精子運動，免疫調(diào)

2、節(jié)等多種作用。此外，從基因水平上得知Bin1b還能促進未成熟精子的運動。為了深入研究Bin1b調(diào)節(jié)細胞表達的機制，本文用蛋白質(zhì)組學方法從蛋白質(zhì)水平找出由Bin1b基因高表達引起蛋白質(zhì)的變化。本文首次采用差異蛋白質(zhì)組學方法研究野牛型RM-1細胞和Bin1b穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的蛋白質(zhì)組的表達差異，得到了野生型RM-1細胞和Bin1b穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞蛋白表達圖譜，找出差異蛋白并分析差異蛋白所表達的功能，找出了由Bin1b基因高表達引起蛋白質(zhì)水平的變化，

3、為研究Bin1b基因奠定了基礎(chǔ)。 本文采用了雙相凝膠電泳（Two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）和基質(zhì)輔助激光解吸電離（matrix-assisted laster desorption/ionization，MALDI）方法研究了野生型RM-1細胞和Bin1b穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的蛋白質(zhì)組的表達差異。首先應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)對蛋白質(zhì)進行分離，每一例樣本均分別進3次雙相電泳進行重復(fù)性實驗，用P

4、DQuest分析軟件對兩組的全蛋白質(zhì)組表達譜進行差異分析，總共發(fā)現(xiàn)15個差異蛋白點（3倍以上差異）。對差異蛋白進行了膠內(nèi)酶解，酶解后的肽段用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜分析，將質(zhì)譜數(shù)據(jù)送入NCBI非冗余數(shù)據(jù)庫，通過MASCOT搜索引擎檢索。最后10個差異蛋白得到成功鑒定。研究中發(fā)現(xiàn)Bin1b可能通過影響微管，肌動蛋白，以及它們的相互作用改變細胞骨架結(jié)構(gòu)，影響細胞的運動及細胞內(nèi)物質(zhì)運輸，并可能通過蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶等蛋白影響細胞外蛋白的