沖擊波對體外培養(yǎng)的鼠成骨細胞增殖分化及粘附遷移的影響.pdf

1、背景：骨折是一種常見多發(fā)病。隨著現(xiàn)代工業(yè)與交通發(fā)展所致的高能量損傷、人口老齡化等一系列因素的影響，骨折不愈合或延遲愈合的發(fā)生率日益增高。因此，尋求一種有效的治療方法一直是骨科界的重要研究課題之一。體外沖擊波是近二十多年來發(fā)展起來的一門新技術，它具有非侵襲性、并發(fā)癥少等優(yōu)點，目前已經(jīng)廣泛應用于醫(yī)學生物領域。體外沖擊波最先應用于治療泌尿系統(tǒng)結石，后來研究發(fā)現(xiàn)沖擊波可激活成骨細胞活性，具有潛在成骨作用，進而促進骨折的愈合，因而更加廣泛地用于骨

2、與軟組織系統(tǒng)疾病的治療。文獻報道體外沖擊波治療骨折不愈合或延遲愈合的成功率為62％~83％，其取得了良好臨床療效，是治療骨折不愈合或延遲愈合的一種有效方法。然而沖擊波促進骨折愈合的具體機制目前尚不清楚，雖然很多學者對此進行了深入研究，但關于沖擊波對成骨細胞粘附及遷移影響的研究尚未見報道，本實驗即對上述問題進行探討。
　　 目的：通過應用沖擊波作用于體外培養(yǎng)的大鼠成骨細胞，確定沖擊波作用的適宜能量值，觀察沖擊波對成骨細胞的增殖、分

3、化、粘附及遷移等的影響，通過檢測介導細胞粘附的重要分子——整合素的表達，分析與其相關的細胞信號轉(zhuǎn)導通路，揭示沖擊波未被發(fā)現(xiàn)的作用機制。
　　 方法：將原代培養(yǎng)的成骨細胞隨機分成沖擊波組（SW組）和對照組，應用不同能量的沖擊波進行處理后接種于96孔培養(yǎng)板，根據(jù)細胞存活率和細胞增殖情況確定適宜的沖擊波能量值。采用CCK-8法細胞增殖測定、細胞分泌堿性磷酸酶測定、茜素紅染色、細胞粘附率測定、傷痕愈合試驗、流式細胞術檢測整合素β1的表達

4、及RT-PCR檢測整合素β1 Mrna的表達等方法，對SW組和對照組的細胞增殖、分化、粘附及遷移進行測定。
　　 結果：沖擊波處理體外原代培養(yǎng)成骨細胞的適宜能量為10kV（500），CCK-8法檢測顯示SW組細胞增殖速度快于對照組（P<0.001）；SW組細胞分泌堿性磷酸酶高于對照組（P<0.001），茜素紅染色分析顯示SW組礦化結節(jié)面積明顯大于對照組（P<0.001），說明SW組細胞的分化程度明顯高于對照組細胞；細胞粘附率測定

5、顯示SW組細胞明顯高于對照組（P<0.01），整合素β1及其Mrna的表達均高于對照組（P<0.001），說明細胞的粘附能力明顯強于對照組；SW組細胞遷移的平均距離大于對照組（P<0.05），說明SW組細胞的遷移能力明顯強于對照組。
　　 結論：采用植塊法培養(yǎng)的成骨細胞，經(jīng)過反復貼壁法進行純化，可以得到純度較高的成骨細胞，并且較好地保持了細胞膜的生物特性，適用于細胞學方面的實驗研究。適宜能量沖擊波可促進成骨細胞的增殖、分化、粘附