2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 探討丹參對體外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞(human mesenchymal stem cells.MSCs)的增殖及向成骨細胞轉(zhuǎn)化的影響。將中藥研究與細胞工程相結(jié)合,推動中藥現(xiàn)代化的進程,開拓中藥與細胞工程研究,有重要的學術價值、實用價值與社會意義。 方法: 1.建立hMSCs體外分離、培養(yǎng)和鑒定的方法體系。用Percoll梯度分離液離心分離單個核細胞后,置于37℃、5%CO2、飽和濕度孵箱培養(yǎng)、傳代擴增。

2、3代以后的細胞用于實驗。其中:實驗組細胞用10ug/ml丹參素培養(yǎng)液培養(yǎng),對照組用普通培養(yǎng)液培養(yǎng)。以上二組培養(yǎng)條件同前,換液,傳代方法同前。倒置顯微鏡觀察;測定其生長增殖曲線;酶聯(lián)免疫法行細胞表面抗原檢測。鑒定從骨髓中分離培養(yǎng)的細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。 2.定向誘導hMSCs向成骨細胞分化。 取生長狀態(tài)的良好的第三代 hMSCs,調(diào)整其濃度為105/ml左右,每取0.5ml接種于12孔培養(yǎng)板,當細胞達到60%-70%融合

3、時,棄培養(yǎng)液,實驗分成三個平行組(A、B、C),A組空白組:不加任何誘導濟;B對照組:誘導液(普通培養(yǎng)液加100nmol/Dex,10mmol/Lβ—GP,50umol/LAA)進行培養(yǎng):C組:實驗組:誘導液+10ug/ml丹參素培養(yǎng)液,作用24小時后,B組換成新鮮培養(yǎng)液,C組換成10ug/ml丹參素培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。視培養(yǎng)基顏色變化,每隔2—3天更換培養(yǎng)液。倒置顯微鏡逐日觀察細胞生長增殖及形態(tài)變化情況,行堿性磷酸酶染色和Yon—Eoss

4、a法鈣結(jié)節(jié)染色。 結(jié)果: 密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法能有效分離提純hMSCs,體外培養(yǎng)的原代細胞在48h內(nèi)有少量細胞貼壁,隨后形成紡錐狀成纖維細胞樣集落單位,隨著培養(yǎng)時間的延長,細胞形態(tài)逐漸趨于一致;細胞生長增殖活躍;CD29和CD71表達陽性,CD34表達陰性。在誘導培養(yǎng)的第7天實驗組堿性磷酸酶染色陽性,第7天Von-Kossa法鈣結(jié)節(jié)染色陽性。對照組細胞堿性磷酸酶染色大部分為陰性,少數(shù)為弱陽性。Yon--Kossa法

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