2003年廣州地區(qū)登革病毒感染快速診斷及可能來(lái)源分析.pdf

1、　　目的 比較免疫層析法(Immununochromatographic Test,ICT)、酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫斑點(diǎn)法(Dlot Immunobinding Assay,DIBA)檢測(cè)登革DV-IgM/IgG抗體的敏感性、特異性及其他優(yōu)缺點(diǎn)。
　　建立疑似登革病毒感染的病原快速鑒定分型方法,對(duì)廣州市區(qū)2003年仲夏一批疑似登革病毒感染患者進(jìn)行確診,

2、并從基因水平分析該流行株的可能來(lái)源。
　　方法 用ICT法、ELISA法和DIBA法同時(shí)檢測(cè)明確診斷為登革熱和流行性出血熱、瘧疾、乙腦、流感、鉤體等其他發(fā)熱患者標(biāo)本的DV-IgM/IgG抗體,比較測(cè)試結(jié)果。
　　用ICT法檢測(cè)2003年廣州地區(qū)早期疑似患者的DV-IgM,DIBA法檢測(cè)DV-IgG抗體；同時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)病毒分離、逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(Reverse Transcriptase-Poly

3、merase Chain Reaction-RestrictionFragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)技術(shù)分別進(jìn)行病原的分離和鑒定；并對(duì)所分離到的毒株進(jìn)行基因克隆、測(cè)序,并與國(guó)際參考株及國(guó)內(nèi)流行株相應(yīng)的序列進(jìn)行同源性分析,結(jié)合患者的流行病學(xué)資料推測(cè)本次流行株的可能來(lái)源。
　　結(jié)果 用ICT法(澳大利亞PANBIO Limited)檢測(cè)登革熱患者DV-IgM的陽(yáng)性率為60.4%(32/5

4、3),DV-IgG無(wú)一例陽(yáng)性；檢測(cè)非登革感染發(fā)熱患者DV-IgM的假陽(yáng)性率為14.7%(5/53),DV-IgG無(wú)一例陽(yáng)性。用ELISA法(德國(guó)GMBH)檢測(cè)登革熱患者DV-IgM的陽(yáng)性率為66.0%(35/53),DV-IgG的陽(yáng)性率為70.2%(40/57)；檢測(cè)非登革感染發(fā)熱患者DV-IgM的假陽(yáng)性率為35.3%(12/53),DV-IgG的假陽(yáng)性率為8.8%(3/57)。用ELISA法(澳大利亞PANBIO Limited)檢測(cè)

5、登革熱患者DV-IgM的陽(yáng)性率為75.5%(40/53),DV-IgG的陽(yáng)性率為49.1%(28/57)；檢測(cè)非登革感染發(fā)熱患者DV-IgM的假陽(yáng)性率為11.8%(4/53),DV-IgG無(wú)一例陽(yáng)性。用DIBA法(新加坡Genelabs Diagnostics)檢測(cè)登革熱患者DV-IgM的陽(yáng)性率為84.9%(45/53),DV-IgG的陽(yáng)性率為64.9%(37/57)：檢測(cè)非登革感染發(fā)2003年廣州地區(qū)登革病毒感染快速診斷及可能來(lái)源分析

6、摘要熱患者DV一IgM的假陽(yáng)性率為47.0%(16/53),Dv一IgG無(wú)一例陽(yáng)性。 2003年廣州地區(qū)疑似發(fā)病患者發(fā)病5天內(nèi)血標(biāo)本DV一工gM抗體陽(yáng)性率為56.5%(13/23),Dv一IgG抗體陽(yáng)性率為2一7%(5/23)；發(fā)病5一10天血標(biāo)本Dv一IgM抗體陽(yáng)性率為66.7%(16/24),DV一IgG抗體陽(yáng)性率為70.8%(17/24)。從18份發(fā)病5天內(nèi)患者的血標(biāo)本中分離病毒7份,GD29/2003廣東流行株經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè)

7、以及RT一PCR一RFLP和基因測(cè)序檢測(cè)證實(shí)為DVI感染；用RT一PCR檢測(cè)30份早期患者血標(biāo)本,患者的陽(yáng)性率為83.3%(25/30),其中DV一IgM(一)患者的陽(yáng)性率為93.8%(15/16),DV一IgM(+)患者的陽(yáng)性率為71.4%(10/14)；基因序列分析分析表明,GD29/2003廣東流行株與登革I型病毒柬埔寨流行株及我國(guó)97、99年登革I型病毒流行株的同源性最高,分別為97%、97%、98%。所有患者在發(fā)病前兩個(gè)月均在

8、廣州市區(qū)某大院內(nèi)居住,無(wú)輸血史、無(wú)外出史。結(jié)論通過(guò)比較顯示,工CT法檢測(cè)DV一IgM抗體具有快速敏感、操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn),可單人份操作,不需要特殊設(shè)備,適合在登革熱暴發(fā)流行期間用作疫區(qū)基層醫(yī)療單位的早期初篩試驗(yàn)；ELISA法檢測(cè)DV一工gM/IgG抗體的敏感性和特異性較強(qiáng),且檢測(cè)成本較低,適合在普查及大批量標(biāo)本檢測(cè)時(shí)使用；DIBA法檢測(cè)Dv一工gM抗體的敏感性較強(qiáng),容易判讀結(jié)果,但操作繁瑣、成本昂貴,不適合作為初篩試驗(yàn)；DIBA法檢測(cè)Dv一

9、IgG抗體的敏感性和特異性高,可避免敏感性不高的方法造成的漏檢,與其他黃病毒屬病毒和某些蟲媒傳染病之間的非特異性反應(yīng)很少,可排除干擾因素影響,適合在登革熱散發(fā)期間使用,可作為登革病毒感染的確證實(shí)驗(yàn)。 利用RT一PCR一RFLP技術(shù)對(duì)登革病毒進(jìn)行分型具有敏感、特異、快速的優(yōu)點(diǎn),與DV抗體檢測(cè)結(jié)合起來(lái)應(yīng)用可有效縮短疑似DV感染的確診時(shí)間、降低檢測(cè)成本,具有很好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。2003年廣州登革熱流行為登革I型病毒感染所致,推測(cè)廣東可能