金屬硫蛋白對TGF-β1誘導成纖維細胞增殖的調(diào)控及氧化苦參堿的干預(yù)作用.pdf

1、隨著社會人口的老齡化，心血管疾病已成為嚴重威脅人類健康的主要疾病。而多種心血管疾病都與心肌纖維化(MF)——心肌成纖維細胞(CFs)增殖有著密切的關(guān)系。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)功能異常是多種導致MF因素的最后共同通路，而TGF-β/Smads信號轉(zhuǎn)導通路是TGF-β1發(fā)揮生物學作用的主要信號系統(tǒng)。因此，干預(yù)TGF-β1信號通路，對預(yù)防MF具有重要意義。本研究以TGF-β/Smads信號通路為作用靶點，觀察金屬硫蛋白(MT)對M

2、F的調(diào)控作用及及氧化苦參堿(OMT)的干預(yù)作用。
　　第一部分 MT對體外培養(yǎng)CFs中TGF-β1信號通路的調(diào)控作用
　　目的:研究MT在MF過程中對TGF-β1信號系統(tǒng)的調(diào)控作用，為以MT為干預(yù)靶位的MF的防治提供實驗基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
　　方法:傳代培養(yǎng)CFs，以MTT法確定TGF-β1及MT+TGF-β1作用的最適濃度;正式實驗分為對照組、TGF-β1組(20ng·ml-1)、TGF-β1(20ng·ml-1)+M

3、T高劑量(20ng·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+MT低劑量(10ng·ml-1)組;用Giemsa染色法觀察細胞形態(tài);免疫細胞化學法檢測Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原及Smad2/3的表達。
　　結(jié)果:TGF-β1在20ng·ml-1作用24h時細胞存活率為198％，其A570與對照組比較P＜0.01，促進CFs增殖;TGF-β1(20ng·ml-1)+MT(20ng·ml-1)組及TGF-β1(20ng·ml-1)+M

4、T10(ng·ml-1)組細胞存活率為75.56％和80.00％，顯著低于TGF-β1組(P＜0.01、P＜0.01);Giemsa染色結(jié)果顯示TGF-β1組細胞分裂指數(shù)為0.59％，與對照組(0.31％)比較P＜0.01;TGF-β1+MT各劑量組細胞分裂指數(shù)(0.28％、0.20％)與TGF-β1組比較P＜0.01、P＜0.01;免疫細胞化學結(jié)果顯示TGF-β1能顯著提高CFs中colⅠ、colⅢ及Smad2/3的表達，平均光密度值

5、與對照組比較P＜0.01; TGF-β1+ MT各劑量組細胞平均光密度值顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01）。
　　結(jié)論:MT能抑制TGF-β1誘導的CFs增殖，其機制與調(diào)控TGF-β/Smads信號轉(zhuǎn)導通路、抑制CFs中colⅠ、colⅢ表達有關(guān)。
　　第二部分 OMT對體外培養(yǎng)CFs中TGF-β1信號通路的干預(yù)作用
　　目的:研究OMT在MF過程中對TGF-β1信號系統(tǒng)的干預(yù)作用，為OMT防治MF提

6、供試驗基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
　　方法:傳代培養(yǎng)CFs，以MTT法確定TGF-β1(20 ng·ml-1)+OMT作用的最適濃度;正式試驗分為對照組、TGF-β1(20ng·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+ OMT高劑量(2mg·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+OMT中劑量(1mg·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+OMT低劑量(0.5mg·ml-1)組;用Giemsa染色法觀察細胞形

7、態(tài);以免疫細胞化學法檢測Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原及Smad2/3的表達。
　　結(jié)果:TGF-β1(20ng·ml-1)+OMT2mg·ml-1、1mg·ml-1、及0.5mg·ml-1時細胞存活率分別為78.17％、83.63％、89.09％，顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05）;Giemsa染色結(jié)果顯示TGF-β1+OMT各劑量組細胞分裂指數(shù)(0.27％、0.25％、0.30％)，顯著低于TGF-β1組(

8、P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01);免疫細胞化學結(jié)果顯示TGF-β1+OMT各劑量組能顯著降低TGF-β1誘導的CFs中colⅠ、colⅢ的表達，平均光密度值顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01）;并能顯著降低Smad2/3的表達，平均光密度值顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05）。
　　結(jié)論:OMT能抑制TGF-β1誘導的細胞增殖，其作用機制與干預(yù)TGF-β/Sma