嗅鞘細(xì)胞移植延緩RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性進(jìn)程的研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文嗅鞘細(xì)胞移植延緩RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性進(jìn)程的研究姓名：霍姝佳申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：陰正勤201205第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文神經(jīng)纖維層和嗅小球?qū)?68具有可自體移植的優(yōu)勢，是細(xì)胞移植修復(fù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中很有希望的種子細(xì)胞之一弘”。近年來OECs在視網(wǎng)膜疾病和視神經(jīng)創(chuàng)傷治療方面的應(yīng)用已有報(bào)道”。19。其可以包繞視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞(retinalganglioncell，RGC)的軸突，延緩受損的RG

2、C的壞死，并促進(jìn)視神經(jīng)軸突的再生。然而目前OECs在RP治療方面的應(yīng)用還未見報(bào)道。綜合上述的研究背景以及我實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果，我們提出假設(shè)：嗅鞘細(xì)胞移植抑制Mnner細(xì)胞所形成的膠質(zhì)瘢痕，保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)元，從而延緩RP的視網(wǎng)膜退行性變進(jìn)程。針對以上假設(shè)，本研究采用OECs／ONFs混合細(xì)胞(由于ONFs只是OECs的支持成分，所以以下簡稱OECs)在體移植技術(shù)，利用經(jīng)典視網(wǎng)膜色素變性模型RCS大鼠，對比嗅鞘細(xì)胞移植后移植組、偽手術(shù)組和

3、對照組視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)和功能變化。并初步探討了OECs的作用機(jī)制。主要內(nèi)容及研究結(jié)果如下：l、嗅鞘細(xì)胞離體和在體的生物學(xué)特性研究。通過原代培養(yǎng)法獲得大量的嗅鞘細(xì)胞和嗅球成纖維細(xì)胞的混合細(xì)胞，經(jīng)鞏膜外路法移植入30天齡的RCSP大鼠視網(wǎng)膜下腔。結(jié)果顯示，移植后OECs呈多樣化的伸展形態(tài)，在移植后1周、3—4周和68周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，移植細(xì)胞大量存活，細(xì)胞總數(shù)在移植后34周數(shù)量最多，68周時(shí)數(shù)量下降。移植細(xì)胞在視網(wǎng)膜下腔移植點(diǎn)向周圍逐漸遷移，并向視

4、網(wǎng)膜內(nèi)層遷移。而在術(shù)后4周和8周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，同樣方法移植入正常大鼠視網(wǎng)膜下腔的OECs未見明顯遷移。結(jié)果提示：OECs可在變性的視網(wǎng)膜環(huán)境中生存和遷移，其遷移能力與視網(wǎng)膜環(huán)境密切相關(guān)。2、將表達(dá)綠色熒光蛋白的_QECs移植入RCS大鼠視網(wǎng)膜下胃壟，于移植后4周、8周、12周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察視網(wǎng)膜的形態(tài)和功能變化。結(jié)果顯示，OECs移植組Miiller細(xì)胞的增殖被抑制，其在視網(wǎng)膜下腔形成膠質(zhì)瘢痕的面積減少，Westernblot蛋白定量提示

5、，其增殖相關(guān)蛋白GFAP表達(dá)的水平較偽手術(shù)組相比有顯著下降；視網(wǎng)膜感光神經(jīng)元的凋亡被抑制，神經(jīng)元的數(shù)量顯著高于偽手術(shù)組和對照組，且感光細(xì)胞的形態(tài)優(yōu)于偽手術(shù)組和對照組；閃光視網(wǎng)膜電圖(FERG)評測RCSP大鼠視功能改善情況，發(fā)現(xiàn)OECs移植后視網(wǎng)膜的電生理功能顯著改善。結(jié)果提示：OECs可以抑制變性視網(wǎng)膜Miiller細(xì)胞的異?；罨?，減少視網(wǎng)膜神經(jīng)元的凋亡，保護(hù)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞，改善視網(wǎng)膜功能，從而延緩了視網(wǎng)膜色素變性的進(jìn)程。3、嗅鞘細(xì)胞