Anti-miR-143通過上調(diào)癌基因ABL2促進腎細胞惡性轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、目的：探討miR-143在腎細胞癌中的表達及意義，及其對腎細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中細胞生物學行為的影響，并進一步探究腎細胞惡性轉(zhuǎn)化過程的分子學機制。
　　方法：實時定量PCR檢測腎細胞癌組織中和癌旁組織中miR-143的表達差異，并檢測腎細胞癌細胞株中和正常腎細胞細胞株中miR-143的表達差異。體外轉(zhuǎn)染anti-miR-143后，通過Transwell實驗檢測HK-2細胞遷移能力的改變；通過粘附實驗檢測HK-2細胞粘附能力的改變。通過

2、miR-143靶基因預測軟件miranda預測miR-143在腎細胞癌的潛在靶基因ABL2；同時應用熒光素酶報告基因驗證miR-143和ABL23’UTR的結合能力。應用Western blotting檢測轉(zhuǎn)染anti-miR-143后，miR-143靶基因ABL2的表達。
　　結果：實時定量PCR結果表明，腎細胞癌組織中miR-143的表達水平與癌旁組織相比顯著下降(P＜0.05)；人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞Caki-1、腎癌細

3、胞786-0中miR-143表達水平與人腎小管上皮細胞株HK-2相比顯著下降(P＜0.05)。在Transwell遷移實驗中，轉(zhuǎn)染anti-miR-143后的HK-2細胞遷移通過transwell小室的數(shù)量明顯增加(P＜0.05)。在細胞粘附實驗中，轉(zhuǎn)染anti-miR-143的HK-2細胞粘附數(shù)量較正常HK-2細胞明顯增加(P＜0.05)。應用靶基因預測軟件發(fā)現(xiàn)ABL2是miR-143靶基因之一，3’UTR非保守結合位點有三個(ABL

4、2-1，ABL2-2，ABL2-3)，熒光素酶報告基因結果表明，分別共轉(zhuǎn)染anti-miR-143和各亞型pMir-reporter-ABL2質(zhì)粒后，熒光報告基因的熒光強度與共轉(zhuǎn)NC inhibitor和對應亞型pMir-reporter-ABL2質(zhì)粒相比較明顯增強(P＜0.05)。采用Western blotting檢測潛在靶基因ABL2目的蛋白的表達情況后，發(fā)現(xiàn)anti-miR-143促進ABL2表達。
　　結論：以上結果表明