人牙髓細(xì)胞中差異表達(dá)基因的克隆及DPDP-2和DPDP-3基因序列分析.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文人牙髓細(xì)胞中差異表達(dá)基因的克隆及DPDP2和DPDP3基因序列分析姓名：王忠東申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：口腔醫(yī)學(xué)(口內(nèi))指導(dǎo)教師：肖明振2000.5.1第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要I牙髓組織在損傷、感染等外界刺激的情況下，牙髓成纖維細(xì)胞可以增殖、分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞，分泌修復(fù)性牙本質(zhì)。這是牙髓組具有自身修復(fù)潛能的生物學(xué)基礎(chǔ)。關(guān)于牙髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化機(jī)制的研究，是當(dāng)前牙髓生物學(xué)研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一。近年來，隨著現(xiàn)代細(xì)胞生

2、物學(xué)和分子生物學(xué)的深入研究，關(guān)于牙髓細(xì)胞分化的分子調(diào)控機(jī)制，人們進(jìn)行了大量研究。消減雜交技術(shù)是80年代初期發(fā)展起來的一項(xiàng)尋找細(xì)胞差異表達(dá)基因的技術(shù)。其基本原理是將要比較基因表達(dá)差異的雙方cDNA進(jìn)行雜交，然后從雜交混合相中分離出來未雜交部分，再進(jìn)行分析、鑒定。，我們利用牙髓成纖維細(xì)胞區(qū)別于其它成纖維細(xì)胞的特性，即牙髓成纖維細(xì)胞具有分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞并形成牙本質(zhì)的能力，而牙齦成纖維細(xì)胞者并不具備這種能力，應(yīng)用基于PCR的改良消減雜交技術(shù)～

3、LPs技術(shù)克隆人牙髓細(xì)胞中的特異表達(dá)基因，以期為闡明牙髓細(xì)胞增殖、分化的分子調(diào)控機(jī)制，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)研究共分3部分：!人牙髓細(xì)胞和牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立。7采用組織塊培養(yǎng)法建立了人牙髓細(xì)胞和牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)模型。人牙髓細(xì)胞和牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)的成功率分別為167％、40％。原代培養(yǎng)的細(xì)胞呈長梭形，胞體豐滿、胞漿均勻、核圓、核仁清晰，牙髓、牙齦成纖維細(xì)胞在形態(tài)上無明顯差異。兩種細(xì)胞的生長曲線相近，均呈“S”形。它們

4、的細(xì)胞倍增時(shí)問(DT)分別為HDP：529h和HGF：476h；細(xì)胞的貼壁率為HDP：965％和HGF：986％。經(jīng)抗波形絲蛋白和角蛋白單抗ABC法染色，均呈現(xiàn)出明顯的抗波絲蛋白反應(yīng)陽性，而抗角蛋白反應(yīng)陰性，表明麗種細(xì)胞均為來源于中胚層的成纖維細(xì)胞。＼。2人牙髓細(xì)胞中差異表達(dá)基因的克隆、序列測定及分析在建立人牙髓細(xì)胞和人牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用基于PCR的改良消減雜交技術(shù)一LPs技術(shù)，建立了與人牙髓細(xì)胞生長、分化機(jī)制相關(guān)