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1、青島大學(xué)碩士學(xué)位論文人LIGHT基因的克隆及其在HepG細(xì)胞中的表達(dá)姓名：馬湘申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：肝膽血管外科指導(dǎo)教師：吳力群20060520英文摘要CloningofhumanLIGHTgeneandexpressionoftheclonedmoleculeonHe[IG2cells[Abstract]：ObjectiveToanalyzeLIGHTgeneexpressioninperipheralbloodmononuclea
2、rcellsOBMCs)，tocloneLIGHTgene，toconstructhumanLIGHTexpressingvectortransformintoEcb“，andtransfecthumanlivercancerccHsMethodsPBMCswereconventionallyisolatedandculturedinRPMll640，containing10％FCSTotalRNAwasextractedfromPBM
3、CsLIGHTgeneexpressioninPBMCswasanalyzedbyRTPCRThefulllengthLIGHTcDNAwasamplifiedbyRTPCRTheresultandthevectorpcDNA4CwererespectivelydigestedbyenzymesBamHlandEcoRlLIGHTeDNAwasconnectedwiththeplasmidCalciumChloridemethodwas
4、usedtomakecompetenceThentherecombinantplasmldwastransformedintoEColiJMl09CulturehumanfivercancercelllineHcpG2佃logarithmicgrowthphaseEGFPwastransfectedintoHcpG2ccHsItsexpressionWaSobservedat12h，24hand48haftertransfectionL
5、IGHTrecombinantplasmidwastransfectedintoHepG2cellsbyllposomesTheexpressionofLIGHTWasdetectedwithELISAAstandardcurvewasgeneratedforthesetofsamplesassayedThestatisticalsignificanceWaStestedbySPSSTheconcentrationofLIGHTprot
6、einof12h，24h48h，72h，5daftertransfectionwaselicitedResultsA723bpcDNAwasamplifiedbyRTPCRLIGHTexpressioninPBMCscouldbedetectedinthegroupstimulatedbyPHAAfterconfirmedbyrestrictionendonulcaseanalysisandconnectedwithpcDNA4CLIG
7、HTcDNAwassuccessfullytransformedintoEcoliJMl09PurifiedrecombinantplasmidwasobtainedLIGHTgenesequenceWaSanalyzedThoughonebaseoccurredsynonymousmutation，itdidnotchangecodingaminoacidhumanfivercarlcercelllineHepG2Wasculture
8、dandproliferatedAfterthetransfectiooofEGFPtherecombinantplasmidpcDNA4CLIGHTcouldbetransfectedintoHepG2cellswith0舡gD№～3犁lEnhancerlOrdEffecteneTheexpressionofLIGHTwassuccessfullydetectedwithELISAThecoefficientofcorrelation
9、wasequaltoO997andhadevidentstatisticalsignificanceThequantityofLIGHTproteinWasthegreatestat24handtheleastat5dConclusionLIGHTcDNAwassuccessfullyclonedandtherecombinantplasmidpcDNA4CLIGHTwasconstructedLIGHTwastransfectedin
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