香魚(yú)巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2基因的克隆序列分析及表達(dá).pdf

1、趨化因子（Chemokines）是一種低分子量（8～10 kDa）、通過(guò)免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。它能夠趨化白細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，參與免疫及炎癥反應(yīng)中。根據(jù)其特征性的結(jié)構(gòu)可以分為4類(lèi)，分別是CXC、CC、C和CX3C。巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2（MIP-2）就是一種典型的CXC型趨化因子，可趨化中性粒細(xì)胞到炎癥部位，從而使炎癥反應(yīng)得以消除。本文從香魚(yú)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中獲得 MIP-2基因，閱讀框序列長(zhǎng)為318個(gè)核苷酸，其編碼的前體蛋白由105個(gè)氨基酸組

2、成、相對(duì)分子質(zhì)量為11.6 kDa。N端19個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列。氨基酸序列分析表明，香魚(yú) MIP-2和白斑狗魚(yú) MIP-2的同源性最高，達(dá)54％。與其它魚(yú)類(lèi) MIP-2的同源性介于39%～41%之間，與哺乳動(dòng)物 MIP-2的同源性低于34%。香魚(yú)的MIP-2和其它魚(yú)類(lèi)中的MIP-2和 IL8、IL8-like等均含有 CXC的結(jié)構(gòu)區(qū)域。健康香魚(yú) MIP-2基因 mRNA主要在脾、腎、腦、鰓中表達(dá)，在肝、心、肌肉、腸中表達(dá)量次之。實(shí)時(shí)熒

3、光定量 PCR結(jié)果顯示，鰻利斯頓氏菌侵染香魚(yú)后，各組織中 MIP-2基因 mRNA表達(dá)量均呈上調(diào)趨勢(shì)。尤其以腎組織和肌肉組織中變化最顯著，最高值分別為對(duì)照組的23和25倍。此后表達(dá)量上調(diào)趨緩，趨向恢復(fù)到對(duì)照組表達(dá)水平。采用原核表達(dá)獲得 MIP-2蛋白，免疫小鼠，制備 M IP-2抗血清，免疫印跡驗(yàn)證制備抗血清的效價(jià)。本文闡述了香魚(yú) MIP-2基因表達(dá)與鰻利斯頓氏菌的感染密切相關(guān)，揭示了在香魚(yú)抗菌免疫反應(yīng)中，MIP-2可能具有重要的作用。