褪黑素對人骨髓間充質干細胞的作用研究及其機制初步探討.pdf

1、目的：探討褪黑素(melatonin,Mel)對人骨髓間充質干細胞(mesenchymal stemcells,MSCs)增殖分化的作用，以期優(yōu)化MSCs擴增及向神經元樣細分化的實驗參數；研究Mel干預的MSCs上Mel受體亞型mRNA的表達情況，為進一步研究和臨床應用奠定基礎。 方法： 1.以密度梯度離心結合貼壁培養(yǎng)方法分離MSCs，以含15％胎牛血清L-DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，用流式細胞儀檢測CD45、CD44、CD

2、105。 2.取傳至6代的MSCs，加入不同濃度的Mel，MTT法分別檢測24小時、3天、5天細胞的增殖情況；免疫細胞化學法和PT-PCR法檢測Mel誘導后24h、3天、5天MSCs表面NSE、GFAP的表達。 3.RT-PCR法測定Mel誘導的第6代MSCs上，Mel受體MT<,1>和MT<,2>mRNA的表達情況：提總RNA，逆轉錄，PCR擴增，凝膠電泳，體外基因測序。 結論： 1.本實驗采用密度梯度

3、離心法結合貼壁純化MSCs，建立了穩(wěn)定的MSCs培養(yǎng)增值體系，細胞成活率高，貼壁良好，可連續(xù)傳15代。該采集方法簡便易行，體外擴增容易，細胞獲得主富，可推薦為MSCs研究的常規(guī)培養(yǎng)方法。 2.在Mel誘導下，MSCs可分化為神經元樣細胞；Mel對MSCs的增殖無明顯作用。 3.本實驗用RT-PCR技術，初步證實被Mel誘導的MSCs存在MT<,1>受體mRNA的表達；通過測序，擴增所獲得的基因序列與GenBank的人MT