人骨髓間充質干細胞對慢性粒細胞白血病細胞增殖影響及機制探討.pdf

1、目的：間充質干細胞(mesonehymal stem cells，MSCs)是最早自骨髓中分離出的一類具有自我更新及多向分化潛能的成體干細胞。具有穩(wěn)定和修復造血微環(huán)境，促進造血干細胞增殖、分化，調節(jié)淋巴細胞免疫功能，減輕移植排斥反應等生物學效應。許多資料表明間充質干細胞具有抑制白血病生長的作用，但具體機制不詳。本實驗旨在研究正常人骨髓間充質干細胞與慢性粒細胞白血病(CML)共培養(yǎng)后，間充質干細胞對白血病細胞增殖影響并探討其作用機制。

2、 方法：采集健康供者骨髓血，通過密度梯度離心法結合貼壁培養(yǎng)分離純化人骨髓中的單個核細胞、體外培養(yǎng)傳代、倒置相差顯微鏡觀察細胞生長情況、瑞氏染色，取第三代MSCs經流式細胞儀檢測細胞表面標記。實驗分組：對照組A：單獨培養(yǎng)的初治CML患者的骨髓單個核細胞(CML-MNC，1×10<'4>/ml)；對照組B：單獨培養(yǎng)的健康人第三代MSCs(1×10<'4>/ml)；實驗組a：MSCs+CML-MNC(10：1)共培養(yǎng)；實驗組b：MSCs+

3、CML-MNC(1：1)共培養(yǎng)；實驗組c：MSCs+CNK-MNC(1：10)共培養(yǎng)；每天收集對照組A和實驗組b的各三組CML-MNC計數后取均值，繪制生長曲線。分別于實驗的第三天和第六天收集各培養(yǎng)組的上清液，ELISA法檢測IFN-α含量。 結果：原代和傳代培養(yǎng)的細胞呈大的長梭形，細胞排列具有明顯的方向性，呈平行、漩渦狀、輻射狀排列；流式細胞儀檢測細胞表面標記：CD44陽性(99.6﹪)、CIM5陰性、HLA-DR表達率低。結

4、合細胞的形態(tài)、生長特性，及細胞膜表面標志，考慮所獲得細胞就是骨髓間充質干細胞。與懸浮培養(yǎng)比較，黏附培養(yǎng)的CML-MNC細胞增殖受抑。ELISA法所測得的IFN-α量結果分析：對照組A生成IFN-α的量明顯低于對照組B，更低于各實驗組(a、b、c)，P<0.001，差異有統(tǒng)計學意義。隨著培養(yǎng)時間的延長，生成的IFN-α量越多；各實驗組MSCs濃度越大，上清液中IFN-α的量越多。 結論：MSCs與CML-MNC共培養(yǎng)促使CML-M