雌激素促進(jìn)小鼠陰道組織中COX-2的表達(dá)及其誘發(fā)外陰陰道假絲酵母菌病的機(jī)制研究.pdf

1、外陰陰道假絲酵母菌?。╒ulvovaginal Candidiasis，VVC）是一種婦科常見的陰道粘膜的真菌感染性疾病，該病發(fā)病率高且治療后極易復(fù)發(fā)，對(duì)育齡婦女的身心健康造成了很大的影響。白假絲酵母菌是最常見的致病菌種，約占70%-90%。菌絲形態(tài)的白假絲酵母菌對(duì)宿主有很強(qiáng)的粘附和侵入能力。前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）在白假絲酵母菌形態(tài)轉(zhuǎn)化和增強(qiáng)其致病力過程中起重要作用。與酵母態(tài)相比，菌絲態(tài)的白假絲酵母菌

2、對(duì)宿主具有更強(qiáng)的粘附能力。而白假絲酵母菌在致病過程中，不僅可刺激宿主產(chǎn)生PGE2，其本身也可產(chǎn)生PGE2，兩者相互作用是造成白假絲酵母菌持續(xù)感染人粘膜的發(fā)病機(jī)制之一。環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）是調(diào)節(jié)花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素（Prostaglandins，PGS）的重要限速酶，可被性激素、生長因子及炎性因子等誘導(dǎo)表達(dá)，PGE2是其主要的酶促產(chǎn)物之一。
　　 近年來的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床證據(jù)均表明，高雌激

3、素水平使個(gè)體對(duì)外陰陰道假絲酵母菌病的易感性增加，雌激素促進(jìn)白假絲酵母菌菌絲形成及增殖，使其毒力增強(qiáng)。研究表明，雌激素能顯著性上調(diào)COX-2在人子宮微血管內(nèi)皮細(xì)胞和狗前列腺組織中的表達(dá)。對(duì)COX-2基因序列分析結(jié)果表明，其啟動(dòng)子中含有核轉(zhuǎn)錄因子（Nuclear Factor-κB，NF-κB）結(jié)合位點(diǎn)。NF-κB作為一種具有多向調(diào)節(jié)功能的核轉(zhuǎn)錄因子，其信號(hào)通路的激活可以上調(diào)COX-2的表達(dá)從而促進(jìn)PG的生成。白介素-1β（Interlen

4、kin-1β，IL-1β）是在免疫和炎癥反應(yīng)中起核心作用的細(xì)胞因子，其能夠促進(jìn)NF-κB的表達(dá)和活化?；诖耍陉幍腊准俳z酵母菌感染過程中，雌激素是否能夠上調(diào)陰道組織中COX-2的表達(dá)來促進(jìn)感染形成，NF-κB、IL-1β在雌激素調(diào)控COX-2表達(dá)的過程中起到了何種作用，以及它們與COX-2表達(dá)的協(xié)同關(guān)系，這些問題都值得探討。
　　 本研究采用雌小鼠給予外源性雌激素形成假發(fā)情來建立外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型，應(yīng)用免疫組化和原位

5、雜交方法在細(xì)胞水平和分子水平研究COX-2及其mRNA在小鼠陰道組織內(nèi)的表達(dá)情況，以及應(yīng)用免疫組化，ELISA法觀察陰道組織中NF-κB、IL-1β表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，以及它們與COX-2表達(dá)的協(xié)同關(guān)系，旨在研究雌激素誘發(fā)外陰陰道假絲酵母菌病的作用，藉此探討其致病的可能機(jī)制，為更有效的防治外陰陰道假絲酵母菌病提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。分二部分簡述如下：
　　 第一部分：雌激素誘導(dǎo)外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型中環(huán)氧化酶-2的表達(dá)

6、　　 目的：探討雌激素對(duì)外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型陰道組織中COX-2表達(dá)的影響及其在發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：采用雌性昆明小鼠，預(yù)先皮下注射雌激素使其處于假發(fā)情狀態(tài)，然后接種5×106假絲酵母菌孢子構(gòu)建VVC模型（EI組），并設(shè)置雌激素處理未感染組（E組）、未用雌激素處理感染組（I組）、和空白對(duì)照組（C組）。動(dòng)態(tài)觀察小鼠陰道灌洗液的真菌載荷量及菌絲生成情況，然后在接種后的不同時(shí)間點(diǎn)摘取小鼠陰道組織，對(duì)陰道組織進(jìn)行組織

7、病理學(xué)檢查（HE染色和PAS染色），免疫組化方法檢測陰道組織中COX-2蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：與未用雌激素處理的I組小鼠比較，雌激素處理并接種白假絲酵母菌的EI組小鼠陰道灌洗液的真菌載量分析顯示自第2天開始可分離出高水平的cfu計(jì)數(shù)并持續(xù)到接種后第14天。EI組陰道組織病理結(jié)果發(fā)現(xiàn)自第2天至實(shí)驗(yàn)結(jié)束均可見到陰道粘膜淺層有菌絲生長，陰道粘膜及粘膜下均有炎性細(xì)胞浸潤。除C組外，各組小鼠陰道組織內(nèi)第2天出現(xiàn)COX-2的陽性表達(dá)

8、，持續(xù)升高至第7天達(dá)到高峰；E組在第4、7天COX-2免疫組化檢測OD值分別為0.157±0.017和0.161±0.014，與C組（0.101±0.014和0.106±0.014）比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均<0.05）。EI和I組第7天的OD值分別達(dá)到0.275±0.059和0.234±0.063，與對(duì)照組相比明顯上調(diào)（P均<0.01），且EI組顯著高于I組（P<0.05）。
　　 結(jié)論：在外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型中，雌激

9、素能通過誘導(dǎo)陰道組織中COX-2的表達(dá)在其發(fā)病機(jī)制中起重要作用。
　　 第二部分：雌激素依賴的外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA的表達(dá)及意義
　　 目的：觀察NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA在雌激素依賴的外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型中的動(dòng)態(tài)變化，探討雌激素誘發(fā)VVC的可能機(jī)制。
　　 方法：預(yù)先給雌性小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇以造成并維持其假發(fā)情，再給予小鼠陰道內(nèi)注

10、入約5×106假絲酵母菌穩(wěn)態(tài)芽生孢子，來構(gòu)建VVC模型（此為EI組），并設(shè)置雌激素處理未感染組（E組）、未用雌激素處理感染組（I組）、和空白對(duì)照組（C組）。動(dòng)態(tài)觀察小鼠陰道灌洗液的真菌載荷量，然后在接種后的不同時(shí)間點(diǎn)摘取小鼠陰道組織，應(yīng)用原位雜交法檢測陰道組織中COX-2 mRNA表達(dá)水平；免疫組化檢測NF-κB的表達(dá)；ELISA法檢測組織勻漿中IL-1β的水平。
　　 結(jié)果：COX-2 mRNA在E組陰道組織的表達(dá)水平持續(xù)性明

11、顯高于C組（P<0.01），且EI組表達(dá)水平高于其它三組；接種后第4、7、14天EI組及I組小鼠的IL-1β水平高于C組（P<0.01），第7天達(dá)高峰，EI組小鼠在接種后第4、7天IL-1β表達(dá)水平明顯單純感染的I組（P<0.01）；E組NF-κB的陽性表達(dá)率從第4天開始就明顯高于C組（P<0.01），而EI組顯著高于I組（P<0.01）。
　　 結(jié)論：在雌激素依賴的VVC小鼠模型中，雌激素激活陰道組織中NF-κB信號(hào)通路上調(diào)C