穿心蓮內(nèi)酯通過抑制NF-κB信號(hào)通路對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI-ARDS的保護(hù)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:急性肺損傷(acute lung injury, ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(acuterespiratory distress syndrome，ARDS)是呼吸內(nèi)科和重癥醫(yī)學(xué)科中常見的疾病，有研究報(bào)道，該疾病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前對(duì)ALI/ARDS的發(fā)病機(jī)制還未完全闡明。目前認(rèn)為，ALI/ARDS的發(fā)生是由肺內(nèi)和或肺外多種因素引起的過度的全身炎癥反應(yīng)(systemic inflammatoryresponse syndro

2、me，SIRS)的一部分。ALI/ARDS的發(fā)病機(jī)制涉及了炎癥反應(yīng)，凋亡以及氧化應(yīng)激等多種病理生理現(xiàn)象。穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide)是穿心蓮中主要的二萜內(nèi)酯類化合物和有效成分，具有廣泛的生物活性。最近國(guó)內(nèi)外多篇權(quán)威雜志文章均報(bào)道了穿心蓮內(nèi)酯及其衍生物在抗炎癥、抗氧化、抗凋亡和抗腫瘤方面的顯著作用。同時(shí)有報(bào)道認(rèn)為穿心蓮內(nèi)酯主要是通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)信號(hào)通路減輕炎癥反應(yīng)的。

3、但穿心蓮內(nèi)酯在急性呼吸窘迫癥的研究尚無(wú)報(bào)道。
　　 目的:探討穿心蓮內(nèi)酯通過抑制NF-κB信號(hào)通路對(duì)于LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI/ARDS的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.40只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組（每組10只），即對(duì)照組(control組）、低劑量穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)組(LPS+Andro-L組)、高劑量穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)組(LPS+Andro-H組)和LPS組。
　　 2.使用LPS氣管內(nèi)滴入法造模

4、，并在72小時(shí)后放血處死小鼠。
　　 3.使用Diff-Quik法對(duì)小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。使用ELISA對(duì)肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α水平進(jìn)行測(cè)定。對(duì)小鼠肺組織MPO活性進(jìn)行測(cè)定。對(duì)小鼠肺組織進(jìn)行濕/干比(wet to dry ratio，W/D)測(cè)定。HE染色用于肺組織病理變化觀察和肺組織損傷評(píng)分測(cè)量。使用透射電子顯微鏡(Transmission Elect

5、ron Microscope，TEM)對(duì)肺泡上皮細(xì)胞進(jìn)行觀察。RT-PCR被用于VEGF和VCAM-1 mRNA的測(cè)定。使用Westernblot測(cè)定VEGF、VCAM-1、NF-κB p65、phospho-NF-κB p65和β-actin蛋白的表達(dá)。NF-κB p65 DNA結(jié)合能力使用TransAMTM NFκ B p65Chemi Transcription Factor Assay Kit進(jìn)行檢測(cè)。
　　 4.計(jì)量資

6、料以算術(shù)平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。采用SPSS11.0進(jìn)行單因素方差分析，兩樣本均數(shù)多重比較采用LSD法進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后小鼠BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平較空白組均明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各指標(biāo)較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性(P均＜0.05）。
　　 2.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI

7、72小時(shí)后小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和巨噬細(xì)胞數(shù)較空白組均明顯增加(P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各指標(biāo)較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性（P均＜0.05）。但各組間淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＞0.05）。
　　 3.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后肺組織中MPO活性較空白組均明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各指標(biāo)較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性（P均＜0.05）。
　　 4.LPS在誘導(dǎo)小

8、鼠ALI72小時(shí)后肺組織W/D值較空白組均明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各指標(biāo)較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性（P均＜0.05）。
　　 5.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后肺組織出現(xiàn)明顯病理學(xué)改變肺損傷指數(shù)較空白對(duì)照組明顯增加（P＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后肺損傷指數(shù)較LPS組下降，并呈劑量相關(guān)性(P均＜0.05）。
　　 6.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后電鏡顯示肺泡上皮細(xì)胞出現(xiàn)明顯損傷，在穿心蓮

9、內(nèi)酯干預(yù)后肺泡上皮細(xì)胞損傷減輕。
　　 7.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后肺組織VEGF和VCAM-1 mRNA表達(dá)量較空白對(duì)照組明顯增加（P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各mRNA表達(dá)較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性(P均＜0.05）。
　　 8.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后肺組織VEGF和VCAM-1蛋白表達(dá)量較空白對(duì)照組明顯增加(P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各蛋白表達(dá)量較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性

10、(P均＜0.05）。;
　　 9.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后肺組織phospho-NF-κB p65/total NF-κB p65比值較空白對(duì)照組明顯增加(P均＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后各比值較LPS組降低，并呈劑量相關(guān)性（P均＜0.05）。
　　 10.LPS在誘導(dǎo)小鼠ALI72小時(shí)后肺組織細(xì)胞中NF-κB p65 DNA結(jié)合能力較空白對(duì)照組明顯增加（P＜0.05），在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后NF-κBp65 D