烏司他丁對(duì)膿毒癥大鼠早期下丘腦-垂體-腎上腺軸的影響及意義.pdf

1、目的：膿毒癥(Sepsis)是創(chuàng)傷、燒傷、休克、感染等臨床危重患者的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，也是誘發(fā)膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunctionsyndrome，MODS)的重要原因。膿毒癥是危重患者的主要死亡原因之一，現(xiàn)已成為進(jìn)一步提高危重癥救治成功率的最大障礙。近幾十年來(lái)，人們對(duì)膿毒癥的機(jī)制進(jìn)行了非常投入研究和探索，以期尋找有效的干預(yù)的措施。然而迄今為止，結(jié)果難以令人滿意。神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)理論

2、的提出為我們提供了新的契機(jī)，其中下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸在神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)研究中備受關(guān)注。HPA軸是神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的樞紐，在感染、創(chuàng)傷等應(yīng)激反應(yīng)中起關(guān)鍵性的作用。通過(guò)研究HPA軸在膿毒癥過(guò)程中的變化，將有助于了解膿毒癥的本質(zhì)，并有望開(kāi)辟膿毒癥臨床干預(yù)的新途徑。
　　 烏司他丁是由肝臟分泌的酸性糖蛋白，屬于人體內(nèi)源性抑炎物質(zhì)，是從健康男性尿液中提取精制而成的糖蛋白，烏司他丁能抑制多種蛋白酶活性，清除氧自由基，抑制心肌

3、抑制因子產(chǎn)生，減少炎癥介質(zhì)釋放，調(diào)節(jié)過(guò)度炎癥反應(yīng)，減輕組織損傷，促進(jìn)機(jī)體康復(fù)。
　　 本研究采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法復(fù)制大鼠膿毒癥模型，通過(guò)觀察膿毒癥早期大鼠，血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、皮質(zhì)酮(CORTT)濃度及下丘腦組織促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素mRNA(CRHmRNA)水平及組織超微結(jié)構(gòu)，以及對(duì)比烏司他丁藥物干預(yù)后上述激素水平和組織超微結(jié)構(gòu)的變化，探討HPA對(duì)膿毒癥早期大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)酮濃度及下丘腦組

4、織促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素mRNA水平的調(diào)節(jié)作用及烏司他丁對(duì)膿毒癥大鼠HPA軸的潛在可能影響。
　　 方法：膿毒癥動(dòng)物模型的制備選用經(jīng)典的盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法，選用健康雄性Wistar大鼠36只，體重在250-300g之間，隨機(jī)分為4組：(1)空白對(duì)照組(Normal group):不給予任何處理，直接處死；(2)假手術(shù)組(Sham group):只開(kāi)腹，翻動(dòng)腸管，牽拉盲腸，關(guān)腹，不結(jié)扎和穿孔盲腸；(3)鹽水組行CLP后給予

5、生理鹽水10mL/Kg腹腔注射；(4)烏司他丁組行CLP后給予烏司他丁10萬(wàn)U/Kg腹腔注射，濃度為1萬(wàn)U/mL。各組術(shù)后在腹部皮下注射生理鹽水30ml/kg，補(bǔ)充術(shù)中丟失量和生理需要量。各組均于術(shù)后6小時(shí)經(jīng)頸動(dòng)脈取血2ml，離心后取血漿于-80℃凍存，采用放射免疫法測(cè)定血漿中ACTH、CORTT的水平；各組留取完整下丘腦組織，液氮保存，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcnption-polymerase chain ra

6、ction，RT-PCR)半定量檢測(cè)CRHmRNA在下丘腦中的表達(dá)水平。鹽水組和烏司他丁組各取下丘腦、垂體和腎上腺組織制成3 mm3大小，4％戊二醛固定，應(yīng)用透射電鏡觀察這些組織的超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0版軟件包(SPSS Company,Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)各組正態(tài)性，若符合正態(tài)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，方差齊時(shí)采用完全單因素的方差分析，方差不齊時(shí)采用非

7、參數(shù)的秩和檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后一般情況的觀察：假手術(shù)組大鼠術(shù)后清醒較早，清醒后活動(dòng)較靈活，剖腹未見(jiàn)腹水，無(wú)惡臭，腸管無(wú)水腫。鹽水組術(shù)后蘇醒延遲，精神萎靡，眼角分泌物增多，豎毛，呼吸急促。剖腹可見(jiàn)血性腹水，惡臭，腸管水腫，部分盲腸末端發(fā)黑壞死。烏司他丁組大鼠與鹽水組大鼠相比，表現(xiàn)較輕。
　　 2.下丘腦、垂體和腎上腺組織超微結(jié)構(gòu)變化
　　 2.1 下

8、丘腦組織超微結(jié)構(gòu)變化
　　 2.2 垂體組織超微結(jié)構(gòu)變化鹽水組垂體ACTH細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量而小的內(nèi)分泌顆粒，密度較高；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，脫顆?，F(xiàn)象；線粒體部分嵴缺失、水腫。烏司他丁組垂體ACTH細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)少量?jī)?nèi)分泌顆粒，橢圓形的致密芯，部分分泌顆粒外周有環(huán)形空暈及板層狀線粒體。
　　 2.3 腎上腺組織超微結(jié)構(gòu)變化鹽水組腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞胞質(zhì)水腫，脂滴減少，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少；線粒體水腫，部分嵴和膜缺失。烏司他丁腎上腺皮質(zhì)束狀

9、帶細(xì)胞較大，胞質(zhì)豐富、顏色淺，胞質(zhì)內(nèi)有較多脂滴；管泡狀線粒體，大量滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。
　　 3.CLP模型鹽水組下丘腦組織CRHmRNA(1.151±0.120)和血漿中ACTH(52.387±5.339pg/ml)、CORTT(24.446±0.561ng/ml)水平高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組(CRHmRNA:1.151±0.120比0.412±0.038;1.151±0.120比0.797±0.130，均P＜0.05;ACTH:52

10、.387±5.339pg/ml比21.704±0.492pg/ml;52.387±5.339pg/ml比24.354±1.238pg/ml，均P＜0.05;CORTT:24.446±0.561ml比12.459±1.472ng/ml;24.446±0.561ng/ml比12.486±2.614ng/ml，均P＜0.05)。
　　 4.CLP模型烏司他丁組下丘腦組織CRHmRNA(0.603±0.069)和血漿中ACTH(24.8

11、32±2.426pg/ml)、CORTT(19.686±0.498ng/ml)水平低于鹽水組(CRHmRNA:0.603±0.069比1.151±0.120,P＜0.05;ACTH:24.832±2.426pb/ml比52.387±5.339pg/ml，P＜0.05;CORTT：19.686±0.498ng/ml比24.446±0.561ng/ml,P＜0.05)。
　　 5.手術(shù)組血漿中ACTH(24.354±1.238pg/

12、ml)、CORTT(12.486±2.614ng/ml)水平無(wú)差別于正常對(duì)照組(ACTH:24.354±1.238pg/ml比21.704±0.492pg/ml，P＞0.05)。假手術(shù)組下丘腦組織CRHmRNA(0.797±0.130)水平高于正常對(duì)照組(CRHmRNA:0.797±0.130比0.412±0.038,P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)采用CLP法可成功復(fù)制膿毒癥大鼠動(dòng)物模型。