姜黃素抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究姜黃素對大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞(rVSMC)增殖的影響，篩選一種安全、有效、價廉的藥物用于血管平滑肌異常增殖性疾病的治療和預(yù)防。方法：體外培養(yǎng)rVSMCs，用不同濃度的姜黃素(Curcumin，Cur)(7.5μM、15μM、30μM)進(jìn)行干預(yù)，設(shè)立空白對照、溶劑對照和陽性對照(10nM雷帕霉素，Rapamycin)，觀察使用不同濃度姜黃素后的不同時間點對rVSMCs增殖情況的影響，利用光學(xué)顯微鏡觀察rVSMCs形態(tài)學(xué)變化，

2、采用細(xì)胞計數(shù)及四唑鹽(MTT)檢測rVSMCs生長及增殖的情況，利用免疫印記(Western-Blot)方法檢測姜黃素對細(xì)胞Ras信號通路中p-ERK1/2、p-Akt和Caspase-9的影響。 結(jié)果：1.光學(xué)顯微鏡觀察不同藥濃對rVSMCs生長的影響： 隨著藥物濃度的增高及作用時間的延長，低、中藥物濃度組主要顯示對rVSMCs生長的抑制作用，高濃度組顯示出很強(qiáng)的生長抑制作用及促細(xì)胞凋亡的作用。 2.細(xì)胞計數(shù)檢

3、測不同濃度姜黃素對rVSMCs增殖的影響： (1)空白對照組和溶劑對照組相比，各時間點細(xì)胞計數(shù)結(jié)果無顯著性差異(p＞0.05)。 (2)陽性對照組(雷帕霉素)在24小時、48小時、72小時的的細(xì)胞計數(shù)結(jié)果均比空白對照組和溶劑對照組明顯降低，具有顯著性差異(p＜0.05)，三個時間點的細(xì)胞增殖抑制率分別為31.8％、91.8％、79.6％。 (3)姜黃素藥物組： ①低濃度姜黃素組24小時、48小時的細(xì)胞計數(shù)

4、結(jié)果與空白對照組和溶劑對照組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，72小時的計數(shù)結(jié)果低于空白對照組和溶劑對照組(p＜0.05)；三個時間點的增殖抑制率分別為19.9％、13.2％、26.8％；48小時和72小時的增殖抑制率遠(yuǎn)低于陽性對照組(雷帕霉素)(p＜0.01)。 ②中濃度姜黃素組24小時、48小時、72小時的細(xì)胞計數(shù)結(jié)果均比空白對照組和溶劑對照組低(p＜0.05)；三個時間點的增殖抑制率分別為48.7％、76.6％、69.2

5、％；48小時和72小時的增殖抑制率低于陽性對照組(雷帕霉素)(p＜0.05)。 ③高濃度姜黃素組24小時、48小時、72小時的細(xì)胞計數(shù)結(jié)果均比空白對照組和溶劑對照組明顯降低(p＜0.01)；三個時間點的增殖抑制率分別為58.8％，91.1％，98.3％；48小時的增殖抑制率與陽性對照組(雷帕霉素)相比沒有顯著性差異(p＞0.05)，24小時和72小時增殖抑制率高于陽性對照組(雷帕霉素)(p＜0.05)。 3.四唑鹽(MT

6、T)檢測不同濃度姜黃素對rVSMCs增殖活性的影響： (1)空白對照組和溶劑對照組相比，24小時、48小時、72小時的OD值結(jié)果無顯著性差異(p＞0.05)。 (2)陽性對照組(雷帕霉素)在24小時、48小時、72小時的OD值結(jié)果均比空白對照組和溶劑對照組明顯降低(p＜0.05)，三個時間點的MTT抑制率分別為21.8％、57.4％、66.2％。 (3)姜黃素藥物組： ①低濃度姜黃素組在24小時、48小時

7、OD值結(jié)果與空白對照組和溶劑對照組相比無顯著性差異(p＞0.05)，72小時OD值結(jié)果低于空白對照組和溶劑對照組(p＜0.05)，三個時間點的MTT抑制率分別為-2.9％、22.8％、15.0％；48小時和72小時的MTT抑制率明顯低于陽性對照組(雷帕霉素)(p＜0.01)。 ②中濃度組在24小時、48小時、72小時的OD570值結(jié)果均比空白對照組和溶劑對照組明顯降低(p＜0.05)，三個時間點的MTT抑制率分別為16.3％、5

8、2.3％、60.0％；與陽性對照組(雷帕霉素)相比，三個時間點的MTT抑制率無顯著性差異(p＞0.05)。 ③高濃度組在24小時、48小時、72小時的OD值結(jié)果均比空白對照組和溶劑對照組明顯降低(p＜0.05)，三個時間點的MTT抑制率分別為28.9％、67.8％、87.2％；與陽性對照組(雷帕霉素)相比，24小時、48小時MTT抑制率沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，72小時MTT抑制率明顯高于同一時間點的陽性對照組(雷帕霉素)

9、(p＜0.05)。 4.免疫印記(Western-Blot)方法檢測p-ERK1/2、p-Akt、Caspase-9的水平變化： 姜黃素能明顯抑制p-ERK1/2、p-Akt水平的升高，姜黃素能升高細(xì)胞內(nèi)Caspase-9的水平，且隨著藥物濃度的增加上述效果也更加明顯。 結(jié)論：1.姜黃素能抑制rVSMCs的增殖，且這種抑制作用呈現(xiàn)很強(qiáng)的劑量、時間依賴性，高濃度姜黃素促進(jìn)rVSMCs凋亡。 2.姜黃素抑制r