脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療犬心肌梗死后心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究的目的是探索犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADMSCs)分離、培養(yǎng)的方法；并證明ADMSCs在5-氮雜胞苷(5-aza)誘導(dǎo)下可分化為心肌細(xì)胞；探討同種異體移植ADMSCs在心肌梗死區(qū)存活并分化為心肌細(xì)胞的情況及對(duì)犬心肌梗死后心功能的影響；初步觀(guān)察ADMSCs移植可否改善犬心肌梗死后心功能及其可能機(jī)制。為心肌細(xì)胞成形術(shù)提供移植干細(xì)胞新的種子來(lái)源，為臨床應(yīng)用ADMSCs移植治療急性心肌梗死后心力衰竭提供實(shí)驗(yàn)與理論依據(jù)。 方法:(1)A

2、DMSCs的分離、培養(yǎng)與鑒定：無(wú)菌條件下取犬腹部皮下組織，采用Ⅰ型膠原酶消化法及貼壁法進(jìn)行分離培養(yǎng)；取笫3代細(xì)胞，以磷酸鹽緩沖溶液(PBS)為空白對(duì)照，進(jìn)行CD44、HLA-DR、Ⅷ因子表面抗原的免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。(2)ADMSCs的體外誘導(dǎo)：對(duì)第3代細(xì)胞行5-aza誘導(dǎo)，于第7d、14d、21d和28d時(shí)，觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)變化，并以PBS為空白對(duì)照，用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定心肌細(xì)胞表面特異抗原cTnT的表達(dá)情況。(3)ADMSCs治療心肌梗

3、死后心力衰竭：將雜種犬隨機(jī)分為3組，對(duì)照組，ADMSCs移植組和-aza誘導(dǎo)后ADMSCs移植組，分別給予IMDM培養(yǎng)基、DAPI標(biāo)記的ADMSCs和誘導(dǎo)后DAPI標(biāo)記的ADMSCs心外膜下移植治療；于移植前、移植后1周及移植后4周行超聲心動(dòng)圖檢查，移植后4周行血流動(dòng)力學(xué)檢查；并處死動(dòng)物取心臟標(biāo)本，分別行免疫熒光化學(xué)觀(guān)察移植細(xì)胞存活、分化情況及免疫組織化學(xué)cTnT檢測(cè)、測(cè)定血管密度和膠原容積分?jǐn)?shù)，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)。 結(jié)果:(1)犬

4、脂肪組織中含有大量長(zhǎng)梭形細(xì)胞，免疫化學(xué)鑒定顯示與空白對(duì)照相比較CD44抗原呈陽(yáng)性反應(yīng)，HLA-DR和Ⅷ因子抗原均為陰性反應(yīng)。(2)5-aza誘導(dǎo)后細(xì)胞排列方向漸趨一致，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)。與空白對(duì)照比較21d后多數(shù)細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示心肌肌鈣蛋白T呈陽(yáng)性反應(yīng)。(3)移植后4wDAPI陽(yáng)性的ADMSCs和誘導(dǎo)后ADMSCs可見(jiàn)于梗死邊緣區(qū)及梗死區(qū)，且分化為心肌細(xì)胞表面標(biāo)志物cTnT陽(yáng)性的細(xì)胞；移植后4周，與對(duì)照組比較，ADMSCs移植組

5、與誘導(dǎo)后ADMSCs移植組左室重量指數(shù)和LVESV、非梗死區(qū)膠原容積分?jǐn)?shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)均減少，LVEF、LVSP和+dp/dtmax、血管密度和梗死區(qū)膠原容積分?jǐn)?shù)均增加；且與誘導(dǎo)后ADMSCs移植組及對(duì)照組比較，ADMSCs移植組-dp/dtmax、LVEDP、LVEDV和凋亡細(xì)胞數(shù)均減少，血管密度較少增多。 結(jié)論:犬脂肪組織中含有間充質(zhì)干細(xì)胞，且ADMSCs可在5-aza誘導(dǎo)下分化為心肌樣細(xì)胞。同種異體ADMSCs移植后，移植細(xì)