Rab25對(duì)卵巢癌的促進(jìn)作用及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制.pdf

1、卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤之一。由于目前尚缺乏對(duì)卵巢癌行之有效的早期篩查和診斷方法，致使卵巢癌的治療效果及預(yù)后不佳。對(duì)于卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中具體分子機(jī)制的了解，是尋求有效診斷、治療方法的關(guān)鍵。
　　 Rab25是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)的小GTP酶。近年來的研究表明，Rab25可能與多種人類惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)Rab25是具有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)作用的癌基因產(chǎn)物，但也相反的觀點(diǎn)認(rèn)為Rab25具有抑癌作用。對(duì)于Rab25在

2、惡性腫瘤細(xì)胞中的確切作用，目前的研究結(jié)果尚有分歧，且其相關(guān)的信號(hào)調(diào)節(jié)和分子機(jī)制也未明確。
　　 因此，本課題在兩種人卵巢癌細(xì)胞中應(yīng)用siRNA抑制Rab25的表達(dá)，研究其對(duì)細(xì)胞增殖、自噬、凋亡及侵襲等生物學(xué)行為和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。本課題的研究結(jié)果顯示，Rab25可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力，同時(shí)抑制細(xì)胞的自噬和凋亡；FSH可以上調(diào)Rab25在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)，并部分地通過Rab25起到抑制腫瘤細(xì)胞自噬和凋亡的作用；在卵

3、巢癌臨床標(biāo)本中，Rab25的表達(dá)與腫瘤的臨床分期有關(guān)。
　　 第一部分 Rab25促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖與侵襲，并抑制細(xì)胞自噬和凋亡
　　 目的：檢測(cè)Rab25的表達(dá)與卵巢癌臨床分期之間的關(guān)系；應(yīng)用siRNA干擾技術(shù)抑制卵巢癌細(xì)胞中Rab25的表達(dá)，并檢測(cè)其對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為和相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。
　　 方法：應(yīng)組織芯片和免疫組化方法，分析Rab25在卵巢癌臨床組織中的表達(dá)，及其與卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系；應(yīng)用

4、siRNA轉(zhuǎn)染、實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞內(nèi)Rab25及磷酸化ERK的表達(dá)；應(yīng)用SRB及細(xì)胞周期檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖；應(yīng)用吖啶橙染色及LC3-GFP熒光顆粒檢測(cè)細(xì)胞的自噬；應(yīng)用Annexin V-PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡；應(yīng)用transwell侵襲試驗(yàn)、明膠酶譜和actin蛋白熒光染色檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力；應(yīng)用Western blot檢測(cè)相關(guān)分子蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)Rab25的表

5、達(dá)與卵巢癌的臨床分期正相關(guān)。(2)siRNA抑制了卵巢癌細(xì)胞中Rab25的表達(dá)。(3)干擾Rab25的表達(dá)抑制了卵巢癌細(xì)胞的增殖。(4)干擾Rab25的表達(dá)通過激活ERK1/2通路促進(jìn)了卵巢癌細(xì)胞的自噬和凋亡。(5)干擾Rab25的表達(dá)減弱了卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力。
　　 結(jié)論：Rab25的表達(dá)與卵巢癌的臨床分期正相；Rab25可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞的自噬和凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲能力。
　　 第二部分 FSH通過

6、上調(diào)Rab25的表達(dá)發(fā)揮抑制卵巢癌細(xì)胞自噬和凋亡的作用
　　 目的：探討FSH對(duì)Rab25的調(diào)控作用。
　　 方法：以FSH處理卵巢癌細(xì)胞，觀察FSH對(duì)Rab25表達(dá)的調(diào)控；應(yīng)用SRB及細(xì)胞周期檢測(cè)細(xì)胞的增殖；應(yīng)用吖啶橙染色及LC3-GFP熒光顆粒檢測(cè)細(xì)胞的自噬；應(yīng)用Annexin V-PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡；應(yīng)用transwell侵襲試驗(yàn)、明膠酶譜和actin蛋白熒光染色檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力。
　　 結(jié)果：(1)FS

7、H可以上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中Rab25的表達(dá)。(2)FSH抑制卵巢癌細(xì)胞的自噬和凋亡，其效應(yīng)與Rab25干擾之間存在交互作用。(3)FSH促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲，其效應(yīng)與Rab25干擾沒有交互作用。
　　 結(jié)論：FSH可以上調(diào)卵巢癌細(xì)胞內(nèi)Rab25的表達(dá)；FSH抑制卵巢癌細(xì)胞自噬和凋亡的作用；FSH促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力的作用可能不是通過Rab25實(shí)現(xiàn)的。
　　 本課題的研究結(jié)果提示了Rab25在人類卵巢癌中具有促