CXCR4在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分CXCR4在卵巢癌的表達(dá)及與臨床的關(guān)系
　　 目的:檢測(cè)CXCR4在卵巢癌組織及細(xì)胞株中的表達(dá)，探討其與臨床病理特征之間的關(guān)系及與β-catenin表達(dá)的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 1.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CXCR4、β-catenin在7例正常卵巢上皮組織及49例卵巢癌組織中的表達(dá)，分析CXCR4與臨床病理特征之間的關(guān)系，Pearson’s 法分析CXCR4與β-catenin表達(dá)的相關(guān)性。
　

2、　 2.通過(guò)Real-Time PCR方法檢測(cè)CXCR4在正常卵巢上皮組織、卵巢癌組織及卵巢癌細(xì)胞株中的mRNA的表達(dá)。
　　 3.通過(guò)Western blot 方法檢測(cè)CXCR4在正常卵巢上皮組織及卵巢癌細(xì)胞株中的蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.CXCR4與β-catenin在卵巢癌組織中均具有異常表達(dá)，兩者之間具有顯著的相關(guān)性。CXCR4的表達(dá)與卵巢癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 2.CX

3、CR4 mRNA在卵巢癌組織及卵巢癌細(xì)胞株CAOV3、SKOV3和A2780中均具有高表達(dá)，其表達(dá)量分別為正常卵巢上皮組織中CXCR4 mRNA表達(dá)量的（6.1 0±2.4）倍、（6.01±0.3）倍、（4.33±0.3）倍和（3.62±0.6）倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.卵巢癌細(xì)胞株CAOV3、SKOV3和A2780中CXCR4 蛋白表達(dá)比正常卵巢上皮組織高（3.51±0.08）、（2.95±0.14）、（2.82±

4、0.10）倍，差異顯著。
　　 結(jié)論:CXCR4在卵巢癌組織及細(xì)胞株中均有高表達(dá)，與β-catenin表達(dá)顯著相關(guān)，且與卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 第二部分CXCR4 shRNA 對(duì)卵巢癌細(xì)胞CAOV3 侵襲轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:利用RNAi 技術(shù)沉默CXCR4基因在CAOV3細(xì)胞株中的表達(dá)，觀察干擾后CAOV3細(xì)胞增殖和侵襲能力的變化。
　　 方法:
　　 1.通過(guò)RNAi 技術(shù)

5、構(gòu)建4 條CXCR4 shRNA表達(dá)載體，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染至CAOV3細(xì)胞，用Real-Time PCR法及Western blot 法檢測(cè)shRNA 對(duì)CXCR4的抑制效率。
　　 2.通過(guò)MTT 方法觀察CXCR4基因沉默后CAOV3細(xì)胞增殖的變化。
　　 3.應(yīng)用Transwell 侵襲小室方法觀察CXCR4基因沉默對(duì)CAOV3細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.成功構(gòu)建4 條CXCR4 sh

6、RNA表達(dá)載體，Real-Time PCR結(jié)果表明，與shNC組相比，轉(zhuǎn)染CXCR4 shRNA-151、shRNA-701和shRNA-868組CXCR4的mRNA表達(dá)分別下降了88％（P=0.005）、69％（P=0.019）和91％（P=0.003）,其中shRNA-868抑制效率最為明顯。同時(shí)，Western blot 結(jié)果證明shRNA-868 對(duì)CXCR4 蛋白的表達(dá)有明顯的抑制作用。
　　 2.MTT 方法結(jié)果表明

7、CXCR4 shRNA 對(duì)CAOV3細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。
　　 3.Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)證明CXCR4基因沉默后CAOV3細(xì)胞的體外侵襲能力明顯降低。
　　 結(jié)論：CXCR4基因沉默能夠抑制卵巢癌細(xì)胞株CAOV3的增殖和侵襲能力，CXCR4在卵巢癌轉(zhuǎn)移中起重要作用。
　　 第三部分：干擾卵巢癌CXCR4基因調(diào)控Wnt/β-catenin 通路的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:觀察CXCR4基因沉默后

8、Wnt/catenin 通路相關(guān)基因表達(dá)的變化，探討CXCR4在卵巢癌轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1．Real-Time PCR法檢測(cè)CXCR4 shRNA 對(duì)Wnt/catenin 通路關(guān)鍵基因CTNNB1(編碼catenin)、主要靶基因C-MYC、MMP-9和CD44 及EMT 相關(guān)基因Vimentin和SLUG的mRNA表達(dá)的影響。
　　 2．Western blot 法觀察特異性CXCR4 s

9、hRNA 對(duì)侵襲相關(guān)基因MMP-9和Vimentin 蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1．Real-Time PCR結(jié)果表明CXCR4基因沉默后CTNNB1、MMP-9、CD44、C-MYC、SLUG和Vimentin的mRNA表達(dá)分別下降了90.5％、26.1％、35.4％、93.5％、91.5％和78.3％。
　　 2．Western blot 結(jié)果顯示特異性CXCR4 shRNA 能夠顯著抑制Wnt