氯沙坦治療對自發(fā)性2型糖尿病KKAy小鼠腎小球蛋白表達譜影響的研究.pdf

1、目的:
　　 1、分析血管緊張素受體拮抗劑(ARB)氯沙坦治療對2型糖尿病KKAy小鼠糖尿病腎臟損害的影響以及腎小球蛋白表達譜的變化，從整體水平闡明ARB的治療機制。
　　 2、進行氯沙坦治療后腎小球內(nèi)差異表達蛋白質(zhì)的功能分析，尋找糖尿病腎病新的治療靶點。
　　 方法:
　　 8周齡自發(fā)性2型糖尿病KKAy小鼠隨機分為氯沙坦治療組(n=10)、非治療組(n=10)：8周齡C57BL/6小鼠作為正常對照組(

2、n=10)。飼養(yǎng)12周后，經(jīng)胸主動脈磁珠灌流分離腎小球，提取腎小球蛋白。DIGE最小熒光標記法標記后進行雙向熒光差異凝膠電泳。應用Typhoon多功能成像系統(tǒng)掃描凝膠，DeCyder2-D差異分析軟件進行圖像分析，尋找差異表達蛋白質(zhì)。采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索鑒定差異蛋白。
　　 結(jié)果:
　　 KKAy小鼠的體重和血糖較正常對照C57BL/6組小鼠顯著升高(p＜0.

3、05)，治療組KKAy小鼠尿白蛋白/肌酐比率顯著降低(p＜0.05)。氯沙坦治療顯著改善2型糖尿病KKAy小鼠的白蛋白尿水平和病理損害，而對血糖無影響。通過DeCyder2-D差異分析軟件，發(fā)現(xiàn)KKAy氯沙坦治療組與KK/Ay非治療組腎小球內(nèi)表達差異大于1.1倍的蛋白質(zhì)斑點62個。對其進行肽質(zhì)指紋圖分析，鑒定出41種蛋白質(zhì)。其中表達上調(diào)的蛋白質(zhì)有28個，包括：Sia-a!pha-2，3-Gal-beta-1，4-GlcNAc-R:alp

4、ha2,8-sialyltransferase、 Glycerokinase、 Sulfite oxidase、 Glycine amidinotransferase,Adenosylhomocysteinase、40S ribosomal protein SA、 Annexin A3等：表達下調(diào)的蛋白有13個，包括：Dihydrolipoyllysine-residue acetyltransferase component of p

5、yruvate dehydrogenase complex、 Selenium-binding protein1、 Succinyl-CoA ligase[GDP-forming] subunit beta、 Probable D-lactate dehydrogenase、 Alpha-enolase、 Aspartoacylase-2、14-3-3 proteinzeta/delta、 Tropomyosin alpha-3 cha

6、in、14-3-3 protein epsilon、3-mercaptopyruvate sulfurtransferase、 ATP synthase subunit d、60 kDa heat shock protein、 Stress-70 protein。
　　 氯沙坦治療抑制了糖尿病狀態(tài)下6種蛋白的表達變化，包括：Dihydrolipoyllysine-residue acetyltransferase compone

7、nt of pyruvate dehydrogenasecomplex、 Succinyl-CoA ligase[GDP-forming] subunit beta, mitochondrial、 ATP synthase subunit d、Stress-70 protein, mitochondrial、 Nucleoside diphosphate-linkedmoiety X motif19和Selenium-binding p

8、rotein1。
　　 結(jié)論:
　　 1、氯沙坦治療顯著改善2型糖尿病KKAy小鼠尿白蛋白排泄率和糖尿病腎臟病理損害。
　　 2、糖尿病狀態(tài)下，腎小球固有細胞線粒體氧化呼吸鏈電子傳遞組份構(gòu)成失衡，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞質(zhì)應激蛋白均表達上調(diào)，細胞處于氧化應激狀態(tài)。
　　 3、氯沙坦治療抑制了糖尿病狀態(tài)下ATP synthase subunit d、mitochondrial stress-70 protein