大蒜新素對(duì)HCMV即刻早期、早期和晚期基因轉(zhuǎn)錄水平影響的研究.pdf

1、【目的】研究大蒜新素對(duì)HCMV即刻早期(ie)、早期(e)和晚期(l)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響，以探討大蒜新素抗巨細(xì)胞病毒效應(yīng)的作用機(jī)制。 【方法】選擇病毒增殖周期中最主要的ie基因u1122和u1123(分別編碼IE86和IE72)、標(biāo)志性e基因u154(編碼UL54)和標(biāo)志性l基因u183(編碼pp65)為靶序列設(shè)計(jì)特異性引物和taqman探針，并用GAPDH為管家基因校準(zhǔn)樣本細(xì)胞數(shù)，建立定量檢測(cè)HCMVul122、ul123、u

2、154和u183mRNA的實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)分組為：①大蒜新素(9.6μg/ml)處理AD169株(MOI=2.5)感染細(xì)胞組；②AD169株(MOI=2.5)感染細(xì)胞對(duì)照組；③大蒜新素(9.6μg/ml)處理HCMVIE72缺陷株(△IE72株，其主要即刻早期基因編碼區(qū)外顯子4缺失而不能表達(dá)IE72，MOI=2.5)感染細(xì)胞組；④HCMVIE72缺陷株(MOI=2.5)感染細(xì)胞對(duì)照組。用所建立的實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)檢測(cè)各組細(xì)胞在感

3、染后0.5、2、4、6、12和24h病毒u1122、u1123、u154和u183mRNA水平的動(dòng)態(tài)變化。 【結(jié)果】1.定量檢測(cè)u1123mRNA：AD169株u1123mRNA于感染后0.5h開始表達(dá)，在感染后0.5h～4h時(shí)段迅速升高，然后進(jìn)入平臺(tái)期(4h～12h)，以后略有升高，而△IE72株感染細(xì)胞未檢測(cè)到u1123mRNA。大蒜新素處理AD169株感染細(xì)胞組u1123mRNA表達(dá)量在各時(shí)段均顯著低于AD169株感染細(xì)胞

4、對(duì)照組(P＜0.01)，藥物對(duì)AD169u1123mRNA抑制率在感染后24h最高，達(dá)59.4％。 2.定量檢測(cè)u1122mRNA：AD169株和△IE72株感染的u1122mRNA表達(dá)規(guī)律相似，于感染后0.5h開始表達(dá)，感染后0.5h～4hmRNA表達(dá)量升高迅速，然后進(jìn)入平臺(tái)期(4h～12h)，以后略有升高。大蒜新素在感染后各時(shí)段均顯著抑制AD169和△IE72株感染細(xì)胞u1122mRNA表達(dá)(P＜0.01)，其抑制率于感染后

5、24h最高，分別達(dá)69.3％和82.3％。 3.定量檢測(cè)u154mRNA：AD169株感染細(xì)胞u154mRNA于感染2h后表達(dá)逐漸增多，4h～24h時(shí)段表達(dá)量明顯持續(xù)增加；而△IE72株感染細(xì)胞在感染2h后u154mRNA水平逐漸緩慢升高，增幅明顯低于AD169株感染細(xì)胞。大蒜新素在感染后4h～24h時(shí)段明顯抑制AD169和△IE72株感染細(xì)胞u154mRNA表達(dá)(P＜0.05和P＜0.01)，其抑制率在感染后24h最高，分別為

6、39.8％和52.9％。 4.定量檢測(cè)u183mRNA：兩種病毒感染細(xì)胞在感染6h后開始表達(dá)u183mRNA，其水平迅速增多，以AD169感染變化顯著。大蒜新素明顯抑制AD169和△IE72株感染細(xì)胞u183mRNA表達(dá)，在感染后24h抑制率分別為36.8％和40.2％。 【結(jié)論】1.大蒜新素明顯抑制HCMVAD169株ie基因(u1123和u1122)轉(zhuǎn)錄，抑制率高達(dá)59.4％和69.3％，對(duì)e基因(u154)和l基因