松花粉硫酸酯化多糖對(duì)大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Ca2+調(diào)控及增殖的影響.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、多糖的分子修飾和結(jié)構(gòu)改造即利用糖殘基上的羥基、羧基、氨基等基團(tuán)運(yùn)用化學(xué)方法進(jìn)行修飾,對(duì)提高多糖的生物活性具有重要意義。修飾的方法有很多,如硫酸化、羧甲基化、硒化、甲基化、氧化、部分水解、磷酸酯化、雙基團(tuán)衍生化等。
  目前,研究最多的是多糖的硫酸化修飾。多糖經(jīng)硫酸酯化修飾后富含 SO42-,易與蛋白質(zhì)的特定結(jié)構(gòu)域結(jié)合,由此改變其構(gòu)象并影響其功能,使其活性增強(qiáng)或改變其原有活性。目前對(duì)于硫酸酯化多糖抗病毒、抗腫瘤、抗艾滋病等研究較多,

2、而對(duì)于防治心血管疾病方面卻鮮有報(bào)道。
  本文以馬尾松花粉(Pinus massoniana pollen)為原材料,經(jīng)60%乙醇沉淀、Sevage法去蛋白后得到多糖(PPM60),對(duì)其進(jìn)行純化,各組分多糖用氯磺酸-吡啶法進(jìn)行硫酸酯化修飾,得硫酸酯化多糖(SPPM60),研究PPM60純化組分及其酯化多糖對(duì)大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(VSMCs)內(nèi)游離鈣離子濃度的影響并探討其對(duì)細(xì)胞鈣離子濃度的可能調(diào)節(jié)機(jī)制,同時(shí)檢測(cè)其對(duì)VSMCs增殖的影響

3、,以探討馬尾松花粉多糖對(duì)心血管疾病防治的意義。
  實(shí)驗(yàn)具體分為五部分:
  一、馬尾松花粉多糖的純化
  馬尾松花粉多糖(PPM60)經(jīng) Sephacryl S-400HR層析后,最后得到四個(gè)組分,按洗脫體積大小即分子量大小依次命名為PPM60-A、PPM60-B、PPM60-C、PPM60-D。
  二、馬尾松花粉多糖的硫酸酯化及鑒定
  采用氯磺酸-吡啶法對(duì)多糖純化各組分進(jìn)行硫酸酯化改性,得到硫酸酯化

4、多糖SPPM60-A、SPPM60-B、SPPM60-C及SPPM60-D。用氯化鋇-明膠比濁法鑒定硫酸根含量測(cè)定取代度。結(jié)果表明,得到的四種酯化多糖取代度分別為1.28、1.63、1.31、1.49。
  三、大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)
  采用組織貼塊與酶解兩種方法原代培養(yǎng)大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,成功摸索出較成熟的實(shí)驗(yàn)方法。經(jīng)α-actin免疫組化分析鑒定其純度,取4-10代細(xì)胞進(jìn)行多糖活性的測(cè)定。
  四、各組分多

5、糖及酯化多糖對(duì)大鼠 VSMCs內(nèi)游離鈣離子濃度的影響
  鈣離子熒光探針 Fura2/AM對(duì)平滑肌細(xì)胞進(jìn)行負(fù)載后,采用雙波長(zhǎng)熒光分光光度計(jì)檢測(cè)其胞內(nèi)游離鈣離子濃度,發(fā)現(xiàn) PPM60純化的各組分及其酯化多糖均能顯著降低鈣離子濃度,其中PPM60-A酯化前后對(duì)[Ca2+]i影響差異最大。用PPM60-A及SPPM60-A分別作用VSMCs,檢測(cè)其對(duì)高 K+、去甲腎上腺素(NE)升高胞內(nèi)鈣濃度的影響。結(jié)果顯示,PPM60-A及SPPM6

6、0-A均能抑制[Ca2+]i的升高。說(shuō)明 PPM60-A及SPPM60-A可能通過(guò)細(xì)胞膜上的電壓依賴及受體操縱型鈣通道來(lái)降低VSMCs[Ca2+]i。高 K+預(yù)升高[Ca2+]i后,PPM60-A及SPPM60-A仍能在一定程度上降低胞內(nèi)鈣濃度。提示 PPM60-A及SPPM60-A還可能通過(guò)增加鈣庫(kù)貯存或促進(jìn)鈣排出起到降低胞內(nèi)鈣濃度的作用。
  五、PPM60-A、SPPM60-A對(duì)VSMCs增殖的影響
  NE刺激 VS

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