中藥復(fù)方小續(xù)命湯有效成分組在大鼠體內(nèi)代謝研究.pdf

1、中藥及其復(fù)方是中華民族的瑰寶，是我國研發(fā)自主創(chuàng)新性新藥的重要源泉。中藥復(fù)方藥代動力學(xué)的研究有助于揭示復(fù)方藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制，對中藥用藥理論和配伍機制的闡述具有重要意義。
　　 中藥復(fù)方“小續(xù)命湯”首載于《備急千金要方》（唐·孫思邈），主要用于治療中風(fēng)及中風(fēng)后遺癥，臨床療效顯著，應(yīng)用廣泛。本論文應(yīng)用現(xiàn)代分析技術(shù)分析鑒定了大鼠灌胃中藥復(fù)方小續(xù)命湯后體內(nèi)出現(xiàn)成分及其代謝物，并對其中的3種成分進行了藥代動力學(xué)研究，為中藥復(fù)方“小續(xù)

2、命湯”物質(zhì)作用基礎(chǔ)及體內(nèi)代謝特點的詮釋提供了參考和依據(jù)。
　　 本論文首先建立了高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-FTICRMS和HPLC/LTQ-MSn）對小續(xù)命湯有效成分組和總提物中的化學(xué)成分及大鼠灌胃小續(xù)命湯有效成分組和總提物后血漿、尿、糞和組織臟器中的成分及代謝物進行分析鑒定。色譜條件為：色譜柱：HYPERSIL C18 column（250×4.6 mm，5μm）。流動相：乙腈（A）：0.4％冰醋酸水溶液（B）梯度洗脫。

3、柱溫：30℃；流速：0.8 mL/min。質(zhì)譜條件為：ESI離子源，采用正離子檢測模式；掃描范圍（m/z）：100-1500 u；噴霧電壓：3.5 kV；毛細管溫度：300℃；毛細管電壓：40 V；鞘氣流速：35 arb；輔助氣流速：10 arb；掃尾氣流速：5 arb； Tube lens：120 V；進入質(zhì)譜儀前進行分流，分流比為3:1。
　　 在小續(xù)命湯有效成分組和總提物中均檢測出14種成分，且完全相同，分別為8種黃酮類成

4、分（黃芩苷，甘草素，千層紙素A苷，漢黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素，白楊素和千層紙素A），3種色原酮類成分（升麻苷、升麻素和5-O-甲基維斯阿米醇苷），2種三萜類成分（甘草酸和甘草次酸）和1種單萜類成分（芍藥苷）。在大鼠灌胃小續(xù)命湯有效成分組的血漿中檢測到11種成分，其中包括新發(fā)現(xiàn)的5-O-甲基維斯阿米醇，它是由5-O-甲基維斯阿米醇苷脫去-分子葡萄糖醛酸所形成的代謝物；在尿中檢測到14種成分；在糞中檢測到9種成分。在大鼠灌胃小續(xù)命湯總提物的

5、血漿中檢測到10種成分；在尿中檢測到14種成分；在糞中檢測到8種成分。分別灌胃小續(xù)命湯有效成分組及總提物在大鼠體內(nèi)出現(xiàn)的成分基本相同，說明有效成分組與小續(xù)命湯復(fù)方能夠吸收進入體內(nèi)的主要藥效成分種類差別不大。
　　 對大鼠灌胃小續(xù)命湯有效成分組和總提物后各個成分的組織分布研究，結(jié)果如下：在分別灌胃小續(xù)命湯有效成分組及總提物的組織臟器中共檢出了15種成分，且完全相同。大鼠灌胃小續(xù)命湯有效成分組及總提物后，組織分布的總體特征是相似的，

6、但后者個別組織臟器中檢出的成分要略微多于前者。同時，從檢出成分在各個時間點的分布情況來看，總體上后者檢出成分的分布要廣于前者。另外，本論文探索性地采用主成分分析法對代謝物在大鼠體內(nèi)各個靶器官的分布情況進行了研究。
　　 本論文還建立了HPLC-MS/MS方法測定大鼠灌胃小續(xù)命湯有效成分組后甘草素、千層紙素A苷和漢黃芩苷在血漿中的濃度，并進行了三者的藥代動力學(xué)研究。樣品前處理采用固相萃取，內(nèi)標(biāo)物選用淫羊藿苷。色譜柱：Waters

7、Symmetry C18（100×2.1mm，3.5μm）；流動相：乙腈（A）-0.2％冰醋酸水溶液（B）；洗脫程序：乙腈（A）：0.2％冰醋酸水溶液（B）=30:70，恒度洗脫10 min；流速：0.3 mL/min；柱溫：30℃；進樣體積為10μL。檢測器為帶有ESI離子源的三重四極桿質(zhì)譜檢測器，采用MRM監(jiān)測模式。甘草素、千層紙素A苷和漢黃芩苷在血漿中線性范圍分別為2.55～2.04×103 ng/mL，1.88～1.50×103

8、 ng/mL和2.50～2.00×103 ng/mL；標(biāo)準曲線的線性良好，線性相關(guān)系數(shù)大于0.99。血漿中3種有效成分低、中、高4個濃度的方法回收率在92.6％至113.4％之間，最低定量濃度均低于2.55 ng/mL。血漿樣品中3種被測物的日間和日內(nèi)精密度RSD均小于9.4％。根據(jù)大鼠灌胃小續(xù)命湯有效成分組后千層紙素A苷、漢黃芩苷和甘草素的藥時曲線特征，發(fā)現(xiàn)三者有相似之處，均在5 min和960 min出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象，提示這三種成分均可