戊型肝炎病毒抗原酶聯(lián)免疫法檢測試劑研制及評價.pdf

1、本試驗采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，對戊型肝炎病毒抗原酶聯(lián)免疫試劑的研制及評價進行研究。在微孔板上預包被以大腸桿菌表達HEV ORF2片段的重組抗原免疫家兔制得的HEV多克隆抗體，捕獲樣品中的戊型肝炎病毒抗原，洗板后加入HRP標記的大腸桿菌表達HEV ORF2片段的重組抗原免疫制得的HEV/ORF2/4＃單克隆抗體二次溫育，當樣品中存在戊型肝炎病毒抗原時，將形成“包被抗體-抗原-酶標抗體”復合物，再次洗板后加入TMB顯色劑進行溫

2、育，復合物上連接的HRP使顯色劑生成藍色產(chǎn)物，終止后變?yōu)辄S色。當樣品中無戊型肝炎病毒抗原時，不顯色。通過酶標儀檢測吸光度（A值）從而判斷樣品中HEV病毒抗原存在與否。
　　本試劑評價試驗共收集2216例血清樣本。其中（以臨床背景計）疑似戊型肝炎患者樣本722例;未感染戊肝病毒的患者樣本116例;其它肝病等易混病例及普通人群樣本1494例?？己嗽噭z出126例陽性結(jié)果，258例陰性結(jié)果;HEV RNA方法檢出162例陽性結(jié)果，222

3、例陰性結(jié)果。用HEV RNA方法檢測為陽性的162例樣本中，考核試劑檢測陽性的樣本為103例，考核試劑與HEV RNA方法陽性符合率為64％;在HEVRNA方法檢測為陰性的222例樣本中，考核試劑檢測陰性的樣本為199例，陰性符合率為90％;考核試劑與HEV RNA檢測方法比較，敏感度略低于PCR方法，但抗原檢測的檢出譜高于PCR方法，比PCR更具有一定的實用價值，且操作更為簡便。
　　本試劑具有以下特點:1）本試劑可檢測人血清或

4、血漿中的HEV抗原，含有EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本試劑檢測，不能檢測含懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品;2）本試劑具有很高的診斷靈敏度，特異性強，重復性以及穩(wěn)定性良好;3）本試劑操作簡單快速，對實驗設(shè)施、儀器設(shè)備、環(huán)境和操作人員要求低，整個檢測過程僅需105分鐘，便于醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)開展HEV檢驗工作;4）本試劑與HEV RNA檢測方法比較，敏感度略低于PCR方法，但抗原檢測的檢出譜高于PCR方法，比PCR更具有一定