乳腺癌血管新生的細(xì)胞周期蛋白調(diào)控及蛋白質(zhì)光學(xué)芯片臨床應(yīng)用的探索.pdf

1、該研究選擇可誘發(fā)明顯血管新生的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、MCF-7和神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SK-N-MC,收集腫瘤條件培養(yǎng)液并作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),在觀察腫瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液對HUVEC增殖、凋亡和細(xì)胞周期等細(xì)胞生物學(xué)行為的影響的同時(shí),運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對MDA-CM作用前后的內(nèi)皮細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行了比較.同時(shí)對乳腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行MVD、HER 2表達(dá)的檢測,觀察HER 2受體表達(dá)與血管新生的關(guān)系.用TT法測定細(xì)胞增殖

2、活力,發(fā)現(xiàn)與2﹪FBS的基礎(chǔ)培養(yǎng)液相比,腫瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液可明顯促進(jìn)HUVEC的增殖,增強(qiáng)細(xì)胞增殖活力(P<0.05);通過流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測HUVEC細(xì)胞周期分布的改變,發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液明顯提高S期HUVEC細(xì)胞的數(shù)目并使G<,1>期細(xì)胞數(shù)目減少(P<0.05),導(dǎo)致細(xì)胞周期進(jìn)程加快.三種腫瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液作用的強(qiáng)弱順序?yàn)镾K-CM>MCF-CM>MDA-CM.這提示不同腫瘤細(xì)胞在生長過程中釋放的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在濃度和種

3、類上可能不同,這是造成腫瘤血管新生異質(zhì)性的一方面原因.通過對細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的分析發(fā)現(xiàn),MDA-CM作用后的HUVEC細(xì)胞cyclin D1/E表達(dá)增多,特別是cyclin E,我們推測可能與細(xì)胞所處S期的晚期有關(guān)或者cyclin E調(diào)控通路在MDA-CM的促細(xì)胞周期進(jìn)程中發(fā)揮主要作用.該研究中蛋白質(zhì)組分析結(jié)果顯示,MDA-CM作用后的一種內(nèi)皮來源的具促有絲分裂作用的缺氧性應(yīng)激蛋白enolase-1表達(dá)增加.另外還發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞中Stom

4、atin表達(dá)明顯下降.Stomatin可以負(fù)性調(diào)節(jié)單價(jià)陽離子的膜通透性,與細(xì)胞骨架的形成及細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)間相互作用發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,其表達(dá)水平的降低有可能間接促進(jìn)細(xì)胞分裂的進(jìn)行.該實(shí)驗(yàn)研究了HER 2受體與MDA-CM的促內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的關(guān)系.發(fā)現(xiàn)經(jīng)Herceptin(HER 2受體阻斷劑)作用后的MDA-MB-231細(xì)胞增殖減弱,MDA-CM對HUVEC的促增殖、抗凋亡作用減弱,尤其是后者.Herceptin直接加入培養(yǎng)液中,對HUVE

5、C的生長無明顯影響.該實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),EC-CM亦有較弱的促內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用,其作用強(qiáng)于20﹪FBS-M,但弱于腫瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液;EC-CM還可以促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞增殖,其作用強(qiáng)于MDA-MB-231的基礎(chǔ)培養(yǎng)液.這表明腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在生長過程中可分泌、釋放生長因子,相互影響,共同促進(jìn)血管新生.此外,該實(shí)驗(yàn)還應(yīng)用蛋白質(zhì)光學(xué)芯片技術(shù)對乳腺癌血管新生因子TP進(jìn)行初步研究,為建立一種快速、簡便的臨床檢測方法進(jìn)行了初步探索.最近發(fā)

6、現(xiàn)的基于橢偏光學(xué)原理的蛋白質(zhì)光學(xué)芯片,具有高通量、高分辨率和集成多元化的特點(diǎn).以圖像形式顯示結(jié)果直觀且可進(jìn)行定性、定量測定,是一種簡單、快速和可靠的手段,且不需要像ELISA和熒光免疫法那樣對待測物作標(biāo)記,也就不會對待測物的分子活性造成擾動和損傷,操作簡單,費(fèi)用低廉,對蛋白質(zhì)分子的檢測提供了有力的工具.該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示,腫瘤細(xì)胞生長過程中可釋放促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,后者通過促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程、促進(jìn)細(xì)胞分裂、DNA和蛋白質(zhì)合成以及細(xì)胞遷移