乳腺癌血管新生的細胞周期蛋白調控及蛋白質光學芯片臨床應用的探索.pdf

1、該研究選擇可誘發(fā)明顯血管新生的乳腺癌細胞系MDA-MB-231、MCF-7和神經母細胞瘤細胞系SK-N-MC,收集腫瘤條件培養(yǎng)液并作用于人臍靜脈內皮細胞(HUVEC),在觀察腫瘤細胞條件培養(yǎng)液對HUVEC增殖、凋亡和細胞周期等細胞生物學行為的影響的同時,運用蛋白質組學技術對MDA-CM作用前后的內皮細胞蛋白質表達進行了比較.同時對乳腺癌組織標本進行MVD、HER 2表達的檢測,觀察HER 2受體表達與血管新生的關系.用TT法測定細胞增殖

2、活力,發(fā)現(xiàn)與2﹪FBS的基礎培養(yǎng)液相比,腫瘤細胞條件培養(yǎng)液可明顯促進HUVEC的增殖,增強細胞增殖活力(P<0.05);通過流式細胞儀技術檢測HUVEC細胞周期分布的改變,發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞條件培養(yǎng)液明顯提高S期HUVEC細胞的數(shù)目并使G<,1>期細胞數(shù)目減少(P<0.05),導致細胞周期進程加快.三種腫瘤細胞條件培養(yǎng)液作用的強弱順序為SK-CM>MCF-CM>MDA-CM.這提示不同腫瘤細胞在生長過程中釋放的促血管內皮細胞生長因子在濃度和種

3、類上可能不同,這是造成腫瘤血管新生異質性的一方面原因.通過對細胞周期調控蛋白的分析發(fā)現(xiàn),MDA-CM作用后的HUVEC細胞cyclin D1/E表達增多,特別是cyclin E,我們推測可能與細胞所處S期的晚期有關或者cyclin E調控通路在MDA-CM的促細胞周期進程中發(fā)揮主要作用.該研究中蛋白質組分析結果顯示,MDA-CM作用后的一種內皮來源的具促有絲分裂作用的缺氧性應激蛋白enolase-1表達增加.另外還發(fā)現(xiàn)內皮細胞中Stom

4、atin表達明顯下降.Stomatin可以負性調節(jié)單價陽離子的膜通透性,與細胞骨架的形成及細胞骨架蛋白質間相互作用發(fā)揮調節(jié)作用,其表達水平的降低有可能間接促進細胞分裂的進行.該實驗研究了HER 2受體與MDA-CM的促內皮細胞增殖作用的關系.發(fā)現(xiàn)經Herceptin(HER 2受體阻斷劑)作用后的MDA-MB-231細胞增殖減弱,MDA-CM對HUVEC的促增殖、抗凋亡作用減弱,尤其是后者.Herceptin直接加入培養(yǎng)液中,對HUVE

5、C的生長無明顯影響.該實驗還發(fā)現(xiàn),EC-CM亦有較弱的促內皮細胞增殖的作用,其作用強于20﹪FBS-M,但弱于腫瘤細胞條件培養(yǎng)液;EC-CM還可以促進MDA-MB-231細胞增殖,其作用強于MDA-MB-231的基礎培養(yǎng)液.這表明腫瘤細胞和內皮細胞在生長過程中可分泌、釋放生長因子,相互影響,共同促進血管新生.此外,該實驗還應用蛋白質光學芯片技術對乳腺癌血管新生因子TP進行初步研究,為建立一種快速、簡便的臨床檢測方法進行了初步探索.最近發(fā)

6、現(xiàn)的基于橢偏光學原理的蛋白質光學芯片,具有高通量、高分辨率和集成多元化的特點.以圖像形式顯示結果直觀且可進行定性、定量測定,是一種簡單、快速和可靠的手段,且不需要像ELISA和熒光免疫法那樣對待測物作標記,也就不會對待測物的分子活性造成擾動和損傷,操作簡單,費用低廉,對蛋白質分子的檢測提供了有力的工具.該實驗的結果提示,腫瘤細胞生長過程中可釋放促血管內皮細胞生長因子,后者通過促進細胞周期進程、促進細胞分裂、DNA和蛋白質合成以及細胞遷移