食管鱗癌患者血清miRNA-7、miRNA-24與臨床特征及放化療敏感相關性的研究.pdf

1、本文從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 食管鱗癌患者血清microRNA-7與臨床特征及放化療敏感相關性的研究
　　目的:探討漢族人群食管鱗癌患者血清microRNA-7表達與臨床特征及放化療敏感性之間的相關性，并在細胞水平上對其相關分子機制作初步探討。
　　方法:2012年10月至2013年4月，山東省腫瘤醫(yī)院放療科收治的105例未行手術治療的臨床組織病理學或細胞學證斷為胸段食管鱗癌納入本研究。留取患者治療前血清標

2、本，提取血清總RNA，進行TaqMan探針法RT-PCR檢測各標本中microRNA-7的含量，并對結果與臨床特征及放化療敏感性之間的相關性進行統(tǒng)計分析。并在此基礎上，在細胞水平上對其可能的分子機制作初步探討。研究的終點指標是2周期同步放化療結果后評價放化療療效。統(tǒng)計分析中，用Student檢驗或卡方檢驗分析臨床因素之間的差異。臨床因素等計數(shù)參數(shù)與血清microRNA-7的表達采用卡方的Fisher精確檢驗;放療療效與microRNA-

3、7的相關性采用單因素和多因素分析，計算相應的風險比(HR)及95％可信區(qū)間。P值＜0.05被認為有顯著性差異，所有檢驗均為雙邊模式。食管鱗癌診斷采用ROC曲線評估預測的靈敏度和特異度，曲線下面積值來判斷預測的準確性。采用SPSSStatistics17.0軟件包進行統(tǒng)計分析。
　　結果:納入本研究的105例患者，其中男性69例，女性36例，中位年齡60歲，其中胸上段食管癌患者30例，胸中段食管癌患者60例，胸下段食管癌患者15例。

4、腫瘤長度≦4.0cm的患者有53例，32例患者腫瘤長度為4.1-6.0cm，20例患者的腫瘤長度＞6.0cm.病理顯示，高分化患者24例，54例患者中分化，27例為低分化。在總的105例胸段食管癌患者中，有53例有淋巴結轉移，80例發(fā)現(xiàn)有遠處轉移。CYFRA21-1和CEA水平分別以3.3ng/ml和3.4ng/ml為界值分為高表達和低表達。此外，入組的30例健康志愿者的血清，其中17例男性，13例女性，平均年齡為62歲。本研究納入的所

5、有患者在接受同步放化療后根據(jù)RECIST標準進行療效評價，5例獲CR，57例PR，20例SD，以及23例有PD。CR和PR歸為“放射敏感組”，將SD和PD歸為“放射抗拒組”。用2-ΔΔCt法表示相對定量結果，健康對照組（30例）的血清miR-7是食管鱗癌患者(105例)的4.74倍(P＜0.01)，是放療敏感組的3.35倍(P＜0.01)，是放療抗拒組的7.84倍(P＜0.01)，提示其在食管癌診斷和食管癌放化療敏感性預測方面的潛在價值

6、。此外，我們以中位值為界，miR-7分為高表達、低表達，并以此為基礎對其與臨床特征進行相關分析，發(fā)現(xiàn):miR-7的表達與性別和年齡無相關性，但與腫瘤長度和淋巴結狀態(tài)關系密切。腫瘤越長，microRNA-7表達越低(P＜0.05);淋巴結陽性患者表達更容易偏低(P＜0.05).我們將real-time PCR實驗得到的miR-7的Ct值與腫瘤長度的關系進行相關性分析。結果顯示兩者之間有相關性的(Pearman r=0.489，P＜0.01

7、)。而有關CRT療效與患者臨床特征之間的關系統(tǒng)計得出:療效與CEA(P＜0.05)，Cyfra21-1(P＜0.05)，血清miR-7水平(P＜0.05)，以及骨髓抑制(P＜0.01)關系密切。多因素Logist回歸也提示，ESCC患者療效受以上幾個因素的影響:Cyfra21-1(P=0.038,OR=0.296,95％CI for OR=0.094-0.934),CEA(P=0.022,OR=0.276,95％CI for OR=0.

8、091-0.833),miR-7(P=0.019,OR=0.265,95％CI for OR=0.087-0.800)，骨髓抑制(P=0.000，OR=3.347，95％CI for OR=1.737-6.449)。miR-7轉染ECA-109細胞后72小時，Western blot檢測各組細胞中EGFR蛋白的表達水平顯示:與mimic陰性對照組相比，miR-7mimic轉染組的ECA-109細胞中EGFR蛋白表達水平降低;與inhib

9、itor陰性對照組相比，miR-7inhibitor轉染組的ECA-109細胞中EGFR蛋白表達水平升高?？偨Y:治療前血清中microRNA-7表達水平對食管鱗癌具有潛在的診斷價值及治療敏感性的預測價值，治療前血清中低水平的Cyfra21-1和CEA、高表達的miR-7，以及骨髓抑制毒性嚴重的食管癌患者對放化療更容易敏感。MicroRNA-7的放療敏感預測可能是通過抑制其下游蛋白EGFR的表達來實現(xiàn)的。
　　第二部分 食管鱗癌患者

10、血清microRNA-24與臨床特征及放化療敏感相關性的研究
　　目的:探討漢族人群食管鱗癌患者血清microRNA-24表達與臨床特征及放化療敏感性之間的相關性，并在細胞水平上對其相關分子機制作初步探討。
　　方法:2012年10月至2013年4月，山東省腫瘤醫(yī)院放療科收治的105例未行手術治療的臨床組織病理學或細胞學證斷為胸段食管鱗癌納入本研究。留取患者治療前血清標本，提取血清總RNA，進行TaqMan探針法RT-PCR

11、檢測各標本中microRNA-24的含量，并對結果與臨床特征及放化療敏感性之間的相關性進行統(tǒng)計分析。并在此基礎上，在細胞水平上對其可能的分子機制作初步探討。研究的終點指標是2周期同步放化療結果后評價放化療療效(CR、PR、SD、PD)。統(tǒng)計分析中，用Student檢驗或卡方檢驗分析臨床因素之間的差異。臨床因素等計數(shù)參數(shù)與血清microRNA-24的表達采用卡方的Fisher精確檢驗;放療療效與microRNA-24的相關性采用單因素和多

12、因素分析，計算相應的風險比(HR)及95％可信區(qū)間。P值＜0.05被認為有顯著性差異，所有檢驗均為雙邊模式。食管鱗癌診斷采用ROC曲線評估預測的靈敏度和特異度，曲線下面積值來判斷預測的準確性。采用SPSS Statistics17.0軟件包進行統(tǒng)計分析。
　　結果:納入本研究的105例患者，除第一部分所述，有吸煙史患者50例，飲酒史患者40例，家族史患者24例，CYFRA21-1和CEA水平分別以3.3ng/ml和3.4ng/ml

13、為界值分為高表達和低表達，有低水平Cyfra21-1和CEA的食管鱗癌患者分別為68例和74例。治療過程中骨髓抑制毒性分級，0度患者30例，1度患者40，2度患者25例，3度患者8例，4度骨髓抑制毒性的患者有2例。本研究納入的所有患者在接受同步放化療后根據(jù)RECIST標準進行療效評價，5例獲CR，57例PR，20例SD，以及23例有PD。CR和PR歸為“放射敏感組”，將SD和PD歸為“放射抗拒組”。用2-ΔΔCt法表示相對定量結果，食管

14、鱗癌患者（105例）的血清miR-24是健康對照組（30例）的4.82倍(P＜0.01)，放療敏感組患者（62例）的血清miR-24是放療抗拒組患者（43例）的2.05倍(P＜0.01)，提示其在食管鱗癌診斷和放化療敏感性預測方面的潛在價值。以中位Ct值為界，miR-24分為高表達、低表達，統(tǒng)計得出，臨床收集資料中各因素與血清microRNA-24的表達并無相關性（所有P值均＞0.05）。CRT療效與患者臨床特征之間的關系。如表所示，療

15、效與CEA(P＜0.05)，Cyfra21-1(P＜0.05)，血清miR-24水平(P＜0.05)，以及骨髓抑制(P＜0.01)關系密切。多因素Logist回歸也提示，ESCC患者療效受以上幾個因素的影響:Cyfra21-1(P=0.018，OR=0.253，95％CI for OR=0.081-0.794),miR-24(P=0.011,OR=0.240,95％CI for OR=0.079-0.723)，骨髓抑制(P=0.000，

16、OR=3.134，95％CI for OR=1.677-5.856)。miR-24轉染ECA-109細胞后72小時，Western blot檢測各組細胞中H2AX蛋白的表達水平。結果顯示:與mimic陰性對照組相比，miR-24mimic轉染組的ECA-109細胞中H2AX蛋白表達水平降低;與inhibitor陰性對照組相比，miR-24inhibitor轉染組的ECA-109細胞中H2AX蛋白表達水平升高。
　　結論:治療前血清