嗜鉻細胞瘤全基因組拷貝數(shù)變化分析和相關基因的研究.pdf

1、研究目的：
　　 1.對散發(fā)型嗜鉻細胞瘤細胞的全基因組DNA拷貝數(shù)異常（Copy number variationsCNVs）和雜合性缺失（Loss of heterozygosity LOH）的系統(tǒng)分析，發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關的拷貝數(shù)變化和雜合性缺失的所在染色體區(qū)位，篩選所涉及嗜鉻細胞瘤腫瘤相關基因或者分子標志物，為嗜鉻細胞瘤的診斷與治療提供新的參考資料。
　　 2.分析所篩選基因m-RNA的表達水平在良性與惡性嗜鉻細胞瘤中的

2、分布差異，尋找鑒別良惡性嗜鉻細胞瘤的分子遺傳學標記物，并證明應用SNP芯片是篩選腫瘤相關基因有效性方法。
　　 材料與方法：
　　 1.應用Affymetrix公司GeneChip SNP6.0芯片檢測5例嗜鉻細胞瘤（包括腫瘤組織和自身白細胞）全基因組的DNA拷貝數(shù)異常（包括擴增和缺失）和LoH。
　　 2.分析SNP6.0芯片檢測結果；篩選DNA發(fā)生缺失、擴增區(qū)域或LoH區(qū)域內(nèi)含基因為嗜鉻細胞瘤腫瘤相關基因。<

3、br>　　 3.入選北京協(xié)和醫(yī)院2000年至2008年明確診斷的嗜鉻細胞瘤29例，其中良性組19例，惡性組10例。另取12例正常腎上腺髓質組織為正常對照組。提取各組細胞DNA。應用實時定量PCR（real-time PCR）方法檢測各組候選基因的m-RNA表達情況。
　　 4.統(tǒng)計分析候選基因m-RNA的表達水平在不同病理類型（良/惡性）嗜鉻瘤中的的分布差異，分析候選基因與嗜鉻細胞瘤臨床病理類型及預后之間的關系。
　　

4、 結果：
　　 1.5例嗜鉻細胞瘤組織與配對的正常細胞相比，5例均發(fā)生缺失的染色體是1p21.1-1p21.2；4例或4例以上嗜鉻細胞瘤發(fā)生缺失的染色體主要是1p、3q和11p。
　　 2.5例嗜鉻細胞瘤組織細胞與配對的正常細胞相比，4例或4例以上嗜鉻細胞瘤發(fā)生擴增的染色體主要是5q。
　　 3.5例嗜鉻細胞瘤組織與配對的正常細胞相比，5例嗜鉻細胞瘤，都發(fā)生LOH。其中4例發(fā)生染色體1p、11p、11q的LOH；

5、共同區(qū)域和基因為：11p15.13和SOX6；3例發(fā)生染色體5q的L，OH，共同區(qū)域和基因為：5q31.3和NRG2；2例發(fā)生染色體3p、6q的LOH。
　　 4.在3例共同發(fā)生缺失的染色體5q31.3含基因NRG2以及其同源基因NRG1為候選基因。
　　 5.NRG2-mRNA在良性嗜鉻細胞瘤、惡性嗜鉻細胞瘤和正常腎上腺髓質組織內(nèi)均有表達，在嗜鉻細胞瘤中表達顯著低于正常腎上腺髓質（P<0.01）：而在良惡性嗜鉻細胞瘤組

6、之間無顯著性差異（P>0.05）。NRG1-mRNA在惡性嗜鉻細胞瘤中表達顯著高于良性嗜鉻細胞瘤（P<0.05）。
　　 結論：
　　 1.SNP6.0芯片能夠有效發(fā)現(xiàn)和精確定位嗜鉻細胞流全基因組DNA拷貝數(shù)的微小變化和LoH區(qū)域，可以發(fā)現(xiàn)新的染色體CNV區(qū)域。
　　 2.DNA發(fā)生擴增或缺失可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關，可能是腫瘤的發(fā)病基礎。檢測結果為進一步定位篩選和克隆與嗜鉻細胞瘤相關基因提供了重要的線索和理論信