結(jié)直腸癌中Rac1、MMP-2及Ki-67的表達(dá)研究.pdf

1、目的：侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的兩個重要生物學(xué)特性，是一個極其復(fù)雜的多因素、多步驟過程。該過程受瘤細(xì)胞之間的粘附作用、對周圍細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解能力以及瘤細(xì)胞遷移等因素影響。Rac1屬于小G蛋白，是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐環(huán)節(jié)，被激活后作用于細(xì)胞骨架或其靶蛋白，從而在腫瘤細(xì)胞的形態(tài)與分化、運(yùn)動與遷移、增殖與凋亡等惡性表型方面發(fā)揮生物效應(yīng)。MMP-2是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，促進(jìn)瘤細(xì)胞向周圍組織擴(kuò)散，從而對腫瘤的侵襲

2、和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響。Ki-67是一種較為肯定的細(xì)胞增殖核抗原，被認(rèn)為是能可靠、全面的反應(yīng)細(xì)胞群體增殖活性的客觀指標(biāo)。
　　 本研究擬采用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法（S-P法）聯(lián)合檢測75例結(jié)直腸癌組織中Rac1、MMP-2、Ki-67基因在蛋白水平上的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與結(jié)直腸癌生物學(xué)行為及臨床病理特征（年齡、性別、腫瘤的大小、分化程度、Ducks分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）之間的關(guān)系，探討利用Rac1、MMP-2和Ki-

3、67作為分子標(biāo)記物評估腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的可能性，為進(jìn)一步開展結(jié)直腸癌的研究和臨床治療提供病理學(xué)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.病例
　　 選取邢臺醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院（邢臺市第一醫(yī)院）病理科2006年9月～2008年10月期間手術(shù)切除經(jīng)病理診斷確診的75例結(jié)直腸癌標(biāo)本的存檔蠟塊。年齡25-78歲，中位年齡58歲。發(fā)生部位：結(jié)腸癌29例，直腸癌46例。按照2000年WHO新的結(jié)直腸腫瘤組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)分類：

4、高分化腺癌（Ⅰ級）19例，中分化腺癌（Ⅱ級）31例，低分化腺癌（Ⅲ級）25例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組29例。（根據(jù)Ducks分期）A期11例，B期13例，C期23例，D期28例。選取經(jīng)纖維結(jié)腸鏡及病理檢查未發(fā)現(xiàn)異常的大腸黏膜標(biāo)本12例作為對照。所有患者均為散發(fā)病例，且為初次手術(shù)，術(shù)前均未經(jīng)放射治療或化療。
　　 2.免疫組化染色及結(jié)果判定
　　 采用免疫組化S-P法對結(jié)直腸癌中的Rac1、MMP-2和Ki-

5、67表達(dá)情況進(jìn)行半定量研究。Rac1表達(dá)定位于癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，免疫陽性反應(yīng)物呈黃色、棕黃色或棕褐色顆粒狀。MMP-2表達(dá)定位于癌細(xì)胞及少量間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，免疫陽性反應(yīng)物呈黃色、棕黃色或棕褐色顆粒狀。Ki-67陽性反應(yīng)為細(xì)胞核呈棕褐色，顆粒狀。每例均隨機(jī)觀察10個高倍視野（×400），根據(jù)鏡下棕色反應(yīng)強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)，用半定量積分法判定結(jié)果。
　　 3.統(tǒng)計學(xué)處理
　　 應(yīng)用 SPSS10.0 for windo

6、ws統(tǒng)計軟件包對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行x2檢驗(yàn)、Spearman等級相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.結(jié)直腸癌中Rac1表達(dá)情況：
　　 正常大腸黏膜組織中均未見Rac1蛋白表達(dá)，癌組織中Rac1蛋白陽性表達(dá)占76％，Rac1蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于正常大腸黏膜（P<0.01）。Rac1蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率分別為57.9％（11/19）、74.2％（23/31）、92％（23/25），不同分

7、化程度的結(jié)直腸癌組織中Rac1蛋白表達(dá)有顯著差別，隨著分化程度的降低Rac1蛋白表達(dá)呈逐步上升趨勢（P<0.05）；在Ducks分期A+B組Rac1蛋白陽性表達(dá)率為58.3％（14/24），C+D組陽性表達(dá)率為84.3％（43/51），隨著Ducks分期的增加Rac1蛋白表達(dá)呈逐步上升趨勢，統(tǒng)計學(xué)有顯著差別（P<0.05）；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中Rac1蛋白陽性表達(dá)率為87％（40/46）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組58.6％（17/2

8、9），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　 2.結(jié)直腸癌中MMP-2表達(dá)情況：
　　 正常大腸黏膜組織均未見MMP-2蛋白表達(dá)。癌組織中MMP-2蛋白陽性表達(dá)占77.3％，在癌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)中均見不同程度的MMP-2陽性表達(dá)，但以癌細(xì)胞為主。癌組織中MMP-2蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于正常大腸黏膜（P<0.01）。MMP-2蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中陽性表達(dá)分別為52.6％（10/19）、83.9％（26/31

9、）、88％（22/25），不同分化程度的結(jié)直腸癌組織中MMP-2蛋白表達(dá)有顯著差別，隨著分化程度的降低MMP-2蛋白表達(dá)呈逐步上升趨勢（P<0.05）；在Ducks分期A+B組MMP-2蛋白陽性表達(dá)率為58.3％（14/24），C+D組陽性表達(dá)率為86.3％（44/51），隨著Ducks分期的增加MMP-2蛋白表達(dá)呈逐步上升趨勢，有顯著差別（P<0.05）；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中MMP-2蛋白陽性表達(dá)為87％（40/46）明顯高

10、于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組62.1％（18/29），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3.結(jié)直腸癌中Ki-67表達(dá)情況：
　　 正常大腸黏膜上皮細(xì)胞大部分未見Ki-67蛋白表達(dá)，僅1例陽性細(xì)胞百分率為8％，呈弱陽性。癌組織中細(xì)胞陽性百分率明顯升高，占68％（51/75），其陽性表達(dá)率明顯高于正常大腸黏膜（P<0.01）。Ki-67蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率分別為52.6％（10/19）、61.3％（19/3

11、1）、88％（22/25），不同分化程度的結(jié)直腸癌組織中Ki-67蛋白表達(dá)有顯著差別，隨著分化程度的降低Ki-67蛋白表達(dá)呈逐步上升趨勢（P<0.05）；在Ducks分期A+B組Ki-67蛋白陽性表達(dá)率為54.2％（13/24），C+D組蛋白陽性表達(dá)率為74.5％（38/51），不同Ducks分期的結(jié)直腸癌組織中 Ki-67蛋白表達(dá)有顯著差別，隨著Ducks分期的增加Ki-67蛋白表達(dá)呈逐步上升趨勢（P<0.05）；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸

12、癌組織中Ki-67蛋白陽性表達(dá)率為87％（40/46）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組51.7％（15/29），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 4.結(jié)直腸癌中Rac1、MMP-2和Ki-67表達(dá)的相互關(guān)系
　　 在75例結(jié)直腸癌中，Rac1和MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.65，P<0.01），有統(tǒng)計學(xué)意義。而Rac1和Ki-67表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性（r=0.8，P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.R

13、ac1、MMP-2與Ki-67在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常大腸粘膜，提示這三者的增高可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定的聯(lián)系。
　　 2.直腸癌中Rac1、MMP-2和Ki-67蛋白表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著關(guān)系，提示其增高可能促進(jìn)結(jié)直腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 3結(jié)直腸癌中Rac1與MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)，Rac1與Ki-67的表達(dá)無相關(guān)性。
　　 4.應(yīng)用免疫組化S-P法聯(lián)合檢測Rac