CTLA-4Ig或抗CD40L單抗體外誘導再生障礙性貧血T細胞免疫無能和促進造血恢復的研究.pdf

1、再生障礙性貧血(簡稱再障)是一種異質(zhì)性疾病，是由多種病因引起的骨髓造血功能衰竭，臨床表現(xiàn)為全血細胞減少。再障的發(fā)病機制復雜，涉及造血干細胞損傷，免疫異常，造血微環(huán)境改變等因素。目前多數(shù)研究認為，原發(fā)性再障的主要發(fā)病機制是T細胞介導的骨髓特異性的自身免疫反應，免疫抑制治療則是目前臨床治療再障的主要手段。 再障的干細胞抗原性研究較少，已發(fā)現(xiàn)的可能與再障發(fā)病有關(guān)的自身抗原包括：地西泮結(jié)合抑制物相關(guān)蛋白(DRS-1)和抗驅(qū)動素(anti

2、-kinetin)等，對其與再障發(fā)病相關(guān)性的研究還在進行中。更多的研究主要是集中在T細胞免疫方面，免疫抑制治療針對的也主要是T細胞免疫的抑制?？乖禺愋缘腡細胞活化過程中需要抗原信號和共刺激信號分子的雙重作用，阻斷共刺激信號可誘導抗原特異性的T細胞免疫無能。共刺激阻斷劑用于移植耐受、自身免疫性疾病等的治療，在體內(nèi)、外試驗中已經(jīng)取得比較肯定的療效。 在前期關(guān)于再障T細胞早期激活及共刺激信號分子檢測等研究的基礎(chǔ)上，進一步研究用共刺激

3、信號相關(guān)分子CTLA-4Ig、抗CD40LmAb誘導再障患者骨髓T細胞免疫無能和促進造血的情況，一方面加深對再障免疫發(fā)病機制的認識；另一方面，為探討上述分子作為免疫調(diào)節(jié)劑治療再障的潛能提供實驗室研究資料。主要內(nèi)容包括運用流式細胞分析和甲基纖維素體外半固體培養(yǎng)法，研究CTLA-4Ig/抗CD40LmAb對骨髓T細胞體外增殖、活化及骨髓單個核細胞集落形成的影響。 第一部分CTLA-4Ig或抗-CD40L單抗體外誘導再障患者T淋巴細胞

4、免疫無能的研究 目的：CTLA-4Ig和抗-CD40ImAb分別與B7和CD40l結(jié)合，抑制T細胞發(fā)揮效應所必需的共刺激信號的作用，從而誘導T細胞無能。細胞免疫異常是再障患者免疫發(fā)病機制的主要方面，因此我們主要通過流式細胞術(shù)的方法，觀察CTlA-4Ig/抗-CD40LmAb作用前后骨髓T細胞表型的變化，從而研究CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb對再障骨髓T細胞數(shù)量、亞群及活化狀態(tài)的影響，初步判斷共刺激阻斷對糾正再障異常細胞免

5、疫的可能作用。 結(jié)論： 1.CLTA-4Ig及抗-CD40LmAb(4F1)能夠抑制再障患者骨髓T淋巴細胞的異常活化、增殖。 2.CLTA-4Ig及抗-CD40LmAb(4F1)對重型再障的抑制作用高于非重型再障，對CD4<'+>細胞的抑制作用高于CD8<'+>細胞。 3.CLTA-4Ig較抗-CD40LmAb(4F1)，對再障T淋巴細胞異常增殖、活化的抑制作用更為明顯。 第二部分CTLA-4Ig

6、或抗-CD40L單抗促進再障患者骨髓造血恢復的研究 目的：干細胞損傷是再障的主要病理生理學改變，臨床表現(xiàn)為全血細胞減少，體外試驗表現(xiàn)為骨髓造血前體細胞減少，CD34<'+>細胞比值減低，體外集落培養(yǎng)多系細胞集落生成減少，對造血刺激因子的反應低下。集落培養(yǎng)是研究再障骨髓造血前體細胞增殖、分化能力的一種直觀的方法。我們通過觀察甲基纖維素半固體培養(yǎng)體系中，CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb對再障和正常骨髓單個核細胞GM-CsF形成

7、的影響，初步判斷CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb對再障骨髓造血的可能影響。 結(jié)論： 1．再障患者骨髓單個核細胞體外集落、集簇生成均較正常組明顯減低，以SAA組減低更為明顯。 2．CTLA-4Ig和抗-CD40LmAb均能夠在體外促進再障患者的GM-CFU形成，且二者對SAA的作用較NSAA更為明顯。 3．CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb在甲基纖維素半固體培養(yǎng)體系內(nèi)并不影響正常骨髓的GM-CFU