CTLA4-Ig聯(lián)合shRNA阻斷B7-CD28共刺激通路誘導(dǎo)小鼠T細(xì)胞免疫無能的研究.pdf

1、目的:本課題采用RNAi技術(shù)修飾小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell,DC),通過抑制DC表面共刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表達(dá)并聯(lián)合CTLA4-Ⅰg阻斷B7/CD28協(xié)同刺激通路,從中探討誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞無能的機(jī)理。
　　 方法:體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源DC,利用已構(gòu)建的針對(duì)B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的shRNA質(zhì)粒載體pB7shRNA轉(zhuǎn)染DC,流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后DC表面抗原

2、CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表達(dá)情況,熒光實(shí)時(shí)定量PCR測定轉(zhuǎn)染前后CD80、CD86mRNA表達(dá)水平?；旌狭馨图?xì)胞培養(yǎng)觀察pB7shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DC聯(lián)合CTLA4-Ⅰg對(duì)異系T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響,酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:經(jīng)過體外培養(yǎng),每只小鼠可獲得1.5-2×107個(gè)骨髓來源DC,細(xì)胞具備典型樹突狀結(jié)構(gòu)；pB7shRNA

3、轉(zhuǎn)染DC后,其表面抗原CD80、CD86表達(dá)由90.429±1.967％、71.603±3.679％分別下降至31.028±1.511％、39.288±1.913％,而MHCⅡ、CD11c表達(dá)無明顯變化,CD80、CD86mRNA表達(dá)水平明顯抑制；混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)顯示,pB7shRNA轉(zhuǎn)染DC聯(lián)合CTLA4-Ⅰg對(duì)異系T淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)下降(P=0.000),反應(yīng)體系中IL-2、IFNI-γ表達(dá)水平下降,IL-4、IL-10表達(dá)水平增