體外共培養(yǎng)誘導(dǎo)嗅球神經(jīng)前體細(xì)胞分化為功能性外周神經(jīng)元.pdf

1、目的：聽覺神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的修復(fù)是臨床亟待解決的問(wèn)題之一。近幾年的研究寄希望于將外源性多潛能細(xì)胞移植到內(nèi)耳并替代受損的聽感覺上皮和聽神經(jīng)元的功能。盡管不同來(lái)源的移植細(xì)胞在被移植動(dòng)物的內(nèi)耳可以部分存活，我們對(duì)它們的功能卻一無(wú)所知。我們嘗試在體外模擬內(nèi)耳微環(huán)境，檢測(cè)嗅球來(lái)源神經(jīng)前體細(xì)胞在體外分化進(jìn)程中能否發(fā)育為較成熟的神經(jīng)元，擁有一定的功能。
　　方法：培養(yǎng)嗅球神經(jīng)前體細(xì)胞取自孕14-16d胚胎大鼠，有限稀釋法傳代并免疫熒光染色鑒定神經(jīng)

2、干細(xì)胞及其分化潛能。將嗅球來(lái)源神經(jīng)前體細(xì)胞與新生大鼠耳蝸細(xì)胞懸液共同培養(yǎng)，應(yīng)用免疫組織化學(xué)、膜片鉗技術(shù)、RT-PCR、鈣測(cè)定等技術(shù)檢測(cè)嗅球來(lái)源NPCs在體外分化細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、生理學(xué)特性，并與聽感覺神經(jīng)元——螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：雖然經(jīng)誘導(dǎo)分化得到的神經(jīng)元樣細(xì)胞、毛細(xì)胞樣細(xì)胞的比例仍然不夠高，但是這些細(xì)胞已顯示對(duì)外周神經(jīng)元標(biāo)志物、毛細(xì)胞標(biāo)志物免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性。RT-PCR提示外周感覺神經(jīng)原特異的蛋白與轉(zhuǎn)