別嘌醇鈉注射液對大鼠重癥急性胰腺炎的治療作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的:通過檢測別嘌醇鈉注射液在大鼠重癥急性胰腺炎模型中血清淀粉酶(AMY)、尿酸(UA)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子-a及胰腺組織NF-KB mRNA和TNF-a mRNA表達,觀察別嘌醇鈉對SAP的治療作用和探討作用機制,為臨床使用提供實驗依據(jù)。方法:將120只健康成年雄性大鼠隨機分為正常對照組(A組)、重癥急性胰腺炎模型組(B組)、低劑量別嘌醇鈉治療組(C組)、高劑量別嘌醇鈉治療組(D組),每組30只。通過腹腔注射大劑量的10％

2、L-精氨酸溶液制作大鼠SAP模型并注射別嘌醇鈉。各組造模完成后12h、24h、48h三個時間點各取6只大鼠處死并收集標本,胰腺組織 HE染色后行光鏡病理學檢查,各時間點檢測血清淀粉酶(AMY)、UA、MDA;血清TNF-α值使用酶聯(lián)免疫吸附法(雙抗體夾心 ABC-ELISA法)測定;免疫組織化采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(SP法)檢測胰腺組織中NF-κB p65的表達;實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測胰腺組織中NF-

3、κB mRNA、TNF-α mRNA的表達;數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差( X±s,n-6 )表示,采用統(tǒng)計軟件SPSS17.0對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理;樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析(方差不齊者采用H檢驗);兩者的相關性采用直線相關和直線回歸分析;如果 P<0.05,則認為差異有統(tǒng)計學意義。結果:(1)A組大鼠全部存活;B組平均生存時間:60.58±34.84h,48h生存率:66.67％;C組平均生存時間:74.62±29.08h,48h

4、生存率:83.33％。D組平均生存時間;81.41±26.52h,48h生存率83.33％;兩個治療組與B組的平均生存時間及生存率比較具有差異(P<0.05)。(2)B組大鼠造模后血清AMY、MDA在各時間點上明顯高于A組(P<0.01),24h達到峰值;C組血清 AMY、MDA在24h,48h顯著低于B組(P<0.01),C組血清MDA在24h,48h高于D組(P<0.05);B組血清AMY與同組前一時間點比較均有統(tǒng)計學差異(P<0.

5、01);B組血清 MDA僅在24h與同組前一時間點比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)B組大鼠造模后血清TNF-α、IOD值在各時間點明顯高于A組(P<0.01),在12h升高到峰值;C組在各時間點血清TNF-α顯著低于B組(P<0.01);C組在24h、48h血清TNF-α水平顯著高于D組(P<0.01),C組的IOD值在24h、48h明顯高于D組(P<0.05);D組在48h血清TNF-α水平與同組前一時間點比較有顯著差異(P<

6、0.01);B、C和D組的IOD值與同組前一時間點之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(4)B、C、D組的胰腺組織病理評分顯著高于A組(P<0.01);C組病理評分均顯著低于B組(P<0.01),高于D組(P<0.01);C組、D組病理評分低于同組前一時間點病理評分(P<0.05)。(5)B組 NF-κB p65 mRNA和TNF-αmRNA值各時間點皆高于A組(P<0.05);TNF-αmRNA在12h升高到峰值;C組造模后NF

7、-κB p65 mRNA在12h,48h低于B組(P<0.05),在各時間點高于D組(P<0.05);C組TNF-αmRNA在各時間點低于B組(P<0.05),僅在12h高于D組(P<0.05);B組和C組NF-κBp65 mRNA、TNF-αmRNA與同組前一時間點有統(tǒng)計學差異(P<0.05);D組 NF-κB p65 mRNA僅在24h與同組前一時間點有統(tǒng)計學意義(P<0.05),D組TNF-αmRNA僅在12h與同組前一時間點有統(tǒng)

8、計學意義(P<0.05)。(6)血清TNF-α、MDA、IOD與胰腺病理評分;TNF-α及IOD;NF-κB p65 mRNA和TNF-α mRNA呈正相關(r=0.94、r=0.76、r=0.93 r=0.86、r=0.93,P<0.01)。結論:(1)通過采用腹腔注射大劑量的10％L-精氨酸的方法,能夠成功構建了重癥急性胰腺炎的大鼠模型。(2)氧化應激( OS)及其脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA參與大鼠重癥急性胰腺炎的發(fā)病過程。(3)L-精氨酸