云芝糖肽(PSP)誘導Molt-4細胞凋亡過程中對TNFR1死亡受體通路調(diào)控的研究.pdf

1、云芝糖肽(PSP)是從中藥云芝(Trametes versicolor)COV-1菌株菌絲體內(nèi)提取的成分。作為國家Ⅱ類新藥，PSP被用于癌癥病人減輕化療放療產(chǎn)生的毒副作用。體外研究證明PSP可以誘導人白血病細胞Mol-4發(fā)生凋亡現(xiàn)象。本課題就云芝糖肽(PSP)誘導白血病細胞Molt-4凋亡過程中對TNFR1死亡受體途徑的調(diào)控作用進行研究。
　　 使用透射電鏡觀察400μg/mlPSP誘導Molt-4細胞凋亡的形態(tài)學特征，發(fā)現(xiàn)有染

2、色質(zhì)凝聚，細胞皺縮、凋亡小體形成及釋放等典型的凋亡特征。流式細胞儀分析25、100、400μg/mlPSP作用Molt-4細胞48h，均能夠上調(diào)死亡受體TNFR1陽性細胞比率(PG)，分別增加0.32％、4.08％、11.27％；用400μg/mlPSP作用12、24、36、48h后也均能夠上調(diào)PG，分別增加5.71％、36.48％、37.25％、40.88％。加入2.5μg/100μl抗TNFR1抗體可減少16％因PSP誘導的細胞死亡

3、。ELISA檢測顯示死亡配體TNF-α濃度并未受PSP調(diào)控。免疫沉淀實驗表明PSP可以促進TRADD蛋白與死亡受體TNFR1結(jié)合，形成凋亡復合物。免疫熒光標記發(fā)現(xiàn)PSP能夠促使FADD聚集至細胞膜內(nèi)側(cè)。這些現(xiàn)象均顯示PSP是通過上調(diào)TNFR1死亡受體的表達量，募集胞內(nèi)TRADD、FADD蛋白，從而使死亡信號轉(zhuǎn)導至細胞內(nèi)部，促進細胞凋亡。免疫印跡進一步發(fā)現(xiàn)，Bid分子并未受到PSP調(diào)控，提示PSP調(diào)控的TNFR1死亡受體途徑并未通過Bid