PHI對淋巴母細胞性白血病Molt-4細胞株組蛋白調控的實驗研究.pdf

1、【目的】研究PHI在體外對正常人單個核細胞和淋巴母細胞性白血病Molt一4細胞株的作用，觀察PHI對白血病細胞表觀遺傳學的影響，并初步探討其可能的機制。 【方法】臺盼藍拒染直接計數法、原位細胞凋亡檢測法(TUNNEL法)觀察PHI對正常人單個核細胞增殖及凋亡的影響，采用MTT法、克隆抑制試驗觀察PHI對Molt-4細胞增殖的影響；應用流式細胞術觀察PHI誘導Molt-4細胞凋亡和對細胞周期的影響；用蛋白免疫印跡法(Western

2、Blotting)觀察在PHI作用下Molt一4細胞的凋亡相關蛋白Bcl一2、Caspase-9、Caspase一8、Caspase一3、凋亡底物PRAP表達的變化；用蛋白免疫印跡法(WesternBlotting)檢測PHI對Molt一4細胞的組蛋白H3、H4乙酰化狀態(tài)和H3K4、H3K9甲基化狀態(tài)變化。 【結果】PHI對正常人單個核細胞抑制作用不明顯，未見細胞凋亡。PHI抑制Molt一4細胞增殖，誘導Molt一4細胞凋亡，阻

3、滯Molt-4細胞的細胞周期于G0／G1期，呈時效和量效變化；隨著PHI作用時間和濃度的增加，線粒體膜蛋白Bcl一2，caspase一9及下游caspase一3，凋亡底物PRAP表達下降，而caspase一8未見明顯變化；PHI能明顯抑制組蛋白去乙?；?[{ADC)的活性，且組蛋白乙酰化酶P300表達增加，能顯著提高組蛋白H3、H4乙?；?，組蛋白H3K4甲基化增加而H3K9甲基化水平明顯下降。 【結論】PHI對正常人的單個

4、核細胞的作用較小，卻能抑制Molt-4細胞的增殖并誘導細胞的凋亡，阻滯Molt-4細胞的細胞周期于G0／G1期。提示PHI是一種安全的白血病化療藥物。線粒體凋亡途徑抗凋亡蛋白Bcl一2的裂解、凋亡蛋白Caspase一9的活化，而細胞死亡受體途徑的Caspase一8未見變化，線粒體凋亡途徑可能是其作用的主要機制，凋亡的受體一配體途徑作用較小。PHI能抑制HADC的活性，提高組蛋白乙?；傅谋磉_，進而提高組蛋白乙?；乃?，抑制與異染色體有