云芝糖肽(PSP)誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞細(xì)胞周期阻滯及其調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、云芝糖肽(Polysaccharopeptide of Trametes versicolor,PSP)是從云芝Coy-1菌株深層培養(yǎng)菌絲體內(nèi)提取的結(jié)合蛋白多糖。作為國家Ⅱ類新藥,云芝糖肽被用于癌癥病人減輕化療放療產(chǎn)生的毒副作用。體外研究證明云芝糖肽可以抑制人白血病細(xì)胞Mol-4增殖,并且誘導(dǎo)凋亡,但PSP對白血病細(xì)胞周期的阻滯時相尚存在爭議。本課題就云芝糖肽(PSP)阻滯人白血病Molt-4細(xì)胞周期的時相及其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究。

2、　　 用BrdU短暫標(biāo)記Molt-4細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞時相示蹤,再用PI染色DNA后流式細(xì)胞分析術(shù)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)5和25μg／ml PSP處理3,6和9 h可使被BrdU標(biāo)記的S期細(xì)胞隨著PSP濃度的增加和時間的延長而積累,其中在25μg／mlPSP處理6 h后早S期和中S期細(xì)胞由對照組的17.45％增加至25.13％。高濃度的PSP(0.1mg／ml)在12和24h時也顯示出時效依賴的S期阻滯作用,24h時PSP處理組S細(xì)胞比例由對照組的

3、56.02％增加為67.26％。更高的濃度(0.5和1mg／ml)和更長的處理時間(48h)下凋亡細(xì)胞比例隨PSP作用濃度提高而顯著增加,1mg／ml處理組凋亡細(xì)胞比例達(dá)到47.03％,與0.5mg／ml處理組相比增加了6.58％,但同時S期細(xì)胞減少了10.48％,提示PSP對Molt-4的抑制作用是通過使周期時相阻滯在S期進(jìn)而發(fā)生凋亡而實現(xiàn)的。
　　 Western Blot法測定PSP25μg／ml處理6h,12h和24h后

4、Molt-4細(xì)胞S期控制相關(guān)信號分子CDK2的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)PSP短時間處理即可顯著上調(diào)CDK2的表達(dá)量,6h時CDK2表達(dá)量與對照組相比的增幅為170％。流式細(xì)胞術(shù)CyclinE／DNA和CDK2／DNA雙參數(shù)法進(jìn)一步分析了25μg／mlPSP處理24h后的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)PSP不僅可以上調(diào)CyclinE和CDK2的表達(dá)水平,使其平均熒光強(qiáng)度分別比對照組增加了16.80％和9.39％,更可提升CyclinE和CKD2高表達(dá)的細(xì)胞百分比,使其高