整合素連接激酶及相關(guān)因子在腎間質(zhì)纖維化大鼠模型中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化(RIF)是由多種原因引起的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在腎間質(zhì)內(nèi)過度沉積和間質(zhì)成纖維細(xì)胞的增生而形成,是各種腎臟疾病進(jìn)展到終末期的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)。表達(dá)a-SMA的肌成纖維細(xì)胞(MyoF)是合成ECM的主要細(xì)胞,已有研究表明在RIF過程中約36％的MyoF是由小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來,這過程稱為小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)。TGF-β1是公認(rèn)的致纖維化因子,能通過多種信號傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)EMT的發(fā)生和發(fā)展。ILK是其信號傳導(dǎo)途

2、徑的效應(yīng)分子,介導(dǎo)了TGF-β1誘導(dǎo)腎小管EMT的各個(gè)關(guān)鍵步驟,最終導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。本研究主要通過組織病理學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)和RT-PCR方法,了解ILK、a-SMA及TGF-β1在腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型中的表達(dá),探討它們與腎間質(zhì)纖維化形成的關(guān)系。 方法：1.腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型的建立：選取清潔級SD大鼠72只,隨機(jī)分為三組：正常組、手術(shù)組、假手術(shù)組,手術(shù)組采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎方法,建立腎間質(zhì)纖維化模型,即UUO模型,手術(shù)

3、組大鼠常規(guī)麻醉后在近左腎下極處游離并結(jié)扎左輸尿管；假手術(shù)組大鼠僅行開腹術(shù)游離左輸尿管；正常組不做任何處理。各組大鼠分別于術(shù)后1、3、7、14天處死,取其左腎,觀察左腎大體形態(tài),光鏡下觀察腎臟病理改變及間質(zhì)纖維化程度。2.用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測腎間質(zhì)中的ILK和TGF-β1、a-SMA的表達(dá)情況,進(jìn)一步分析各組之間ILK和TGF-β1、a-SMA表達(dá)量與腎間質(zhì)損傷程度之間的關(guān)系,以及ILK和TGF-β1、a-SMA彼此之間的相關(guān)關(guān)系。3.

4、用逆轉(zhuǎn)錄方法半定量測定IL KmRNA在UUO模型中的表達(dá)量,并分析其與腎間質(zhì)損害程度的關(guān)系。 結(jié)果：1.采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)構(gòu)建腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型成功,未見大鼠死亡。2.腎組織形態(tài)學(xué)改變：與對照組相、假手術(shù)組比,UUO組大鼠腎臟明顯腫大,腎皮質(zhì)變薄,腎盂積水,并隨著時(shí)限的延長而加重。3.免疫組化分析顯示:ILK在正常腎組織中幾乎無陽性表達(dá),UUO模型中,ILK主要表達(dá)在腎間質(zhì),隨著腎間質(zhì)病變程度加重,其陽性表達(dá)面積顯著增加,

5、各組之間表達(dá)有顯著性差異(P<0.001),與腎間質(zhì)病變程度呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.842,P<0.001);TGF-β1在正常腎間質(zhì)中僅有微量的表達(dá),隨著腎間質(zhì)病變程度的加重表達(dá)逐漸增加,各組之間TGF-β1的表達(dá)有顯著性差異(P<0.001),和腎間質(zhì)病變程度呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.892,P<0.001);a-SMA在正常腎組織中,僅表達(dá)于血管平滑肌肌層,在腎小管上皮細(xì)胞胞漿有微量表達(dá),隨腎間質(zhì)病交加重表達(dá)增強(qiáng)各組之間a-SM

6、A的表達(dá)有顯著性差異(P<0.001),和腎間質(zhì)病變程度之間有正相關(guān)關(guān)系(r=0.854,P<0.001)。 結(jié)論：1.ILK作為TGF-β1的下游信號因子參與EMT,EMT可能是致腎間質(zhì)纖維化的一個(gè)重要方式。2.TGF-β1可能在RIF的發(fā)生中起重要作用,EMT可能是TGF-β1致腎間質(zhì)纖維化的一個(gè)重要途徑。3.a-SMA作為MyoF的標(biāo)志蛋白參與EMT,在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生中起重要作用。4.在各種病變程度的腎小管間質(zhì)中,ILK