整合素連接激酶及相關因子在腎間質纖維化大鼠模型中的表達及意義.pdf

1、目的：腎間質纖維化(RIF)是由多種原因引起的細胞外基質(ECM)在腎間質內過度沉積和間質成纖維細胞的增生而形成,是各種腎臟疾病進展到終末期的共同途徑和主要病理基礎。表達a-SMA的肌成纖維細胞(MyoF)是合成ECM的主要細胞,已有研究表明在RIF過程中約36％的MyoF是由小管上皮細胞轉化而來,這過程稱為小管上皮細胞轉分化(EMT)。TGF-β1是公認的致纖維化因子,能通過多種信號傳導途徑誘導EMT的發(fā)生和發(fā)展。ILK是其信號傳導途

2、徑的效應分子,介導了TGF-β1誘導腎小管EMT的各個關鍵步驟,最終導致腎間質纖維化的發(fā)生。本研究主要通過組織病理學觀察、免疫組織化學和RT-PCR方法,了解ILK、a-SMA及TGF-β1在腎間質纖維化動物模型中的表達,探討它們與腎間質纖維化形成的關系。 方法：1.腎間質纖維化動物模型的建立：選取清潔級SD大鼠72只,隨機分為三組：正常組、手術組、假手術組,手術組采用單側輸尿管結扎方法,建立腎間質纖維化模型,即UUO模型,手術

3、組大鼠常規(guī)麻醉后在近左腎下極處游離并結扎左輸尿管；假手術組大鼠僅行開腹術游離左輸尿管；正常組不做任何處理。各組大鼠分別于術后1、3、7、14天處死,取其左腎,觀察左腎大體形態(tài),光鏡下觀察腎臟病理改變及間質纖維化程度。2.用免疫組織化學技術檢測腎間質中的ILK和TGF-β1、a-SMA的表達情況,進一步分析各組之間ILK和TGF-β1、a-SMA表達量與腎間質損傷程度之間的關系,以及ILK和TGF-β1、a-SMA彼此之間的相關關系。3.

4、用逆轉錄方法半定量測定IL KmRNA在UUO模型中的表達量,并分析其與腎間質損害程度的關系。 結果：1.采用單側輸尿管結扎術構建腎間質纖維化動物模型成功,未見大鼠死亡。2.腎組織形態(tài)學改變：與對照組相、假手術組比,UUO組大鼠腎臟明顯腫大,腎皮質變薄,腎盂積水,并隨著時限的延長而加重。3.免疫組化分析顯示:ILK在正常腎組織中幾乎無陽性表達,UUO模型中,ILK主要表達在腎間質,隨著腎間質病變程度加重,其陽性表達面積顯著增加,

5、各組之間表達有顯著性差異(P<0.001),與腎間質病變程度呈顯著正相關關系(r=0.842,P<0.001);TGF-β1在正常腎間質中僅有微量的表達,隨著腎間質病變程度的加重表達逐漸增加,各組之間TGF-β1的表達有顯著性差異(P<0.001),和腎間質病變程度呈顯著正相關關系(r=0.892,P<0.001);a-SMA在正常腎組織中,僅表達于血管平滑肌肌層,在腎小管上皮細胞胞漿有微量表達,隨腎間質病交加重表達增強各組之間a-SM

6、A的表達有顯著性差異(P<0.001),和腎間質病變程度之間有正相關關系(r=0.854,P<0.001)。 結論：1.ILK作為TGF-β1的下游信號因子參與EMT,EMT可能是致腎間質纖維化的一個重要方式。2.TGF-β1可能在RIF的發(fā)生中起重要作用,EMT可能是TGF-β1致腎間質纖維化的一個重要途徑。3.a-SMA作為MyoF的標志蛋白參與EMT,在腎間質纖維化發(fā)生中起重要作用。4.在各種病變程度的腎小管間質中,ILK