乙型肝炎病毒前C-C和前S-S基因異質(zhì)性及其與宮內(nèi)感染關(guān)系的初步研究.pdf

1、該研究運(yùn)用分子生物學(xué)的技術(shù)方法，結(jié)合臨床與流行病學(xué)的資料，分析HBV基因的變異,初步篩選了可能與宮內(nèi)感染有關(guān)的特異性基因結(jié)構(gòu)，探討了HBV基因異質(zhì)性與宮內(nèi)感染的可能關(guān)系，從而為阻斷HBV的宮內(nèi)傳播提供理論依據(jù).方法:①1997年8月~1995年5月和2001年8月~2002年1月收集陜西省婦幼保健院婦產(chǎn)科足月分娩的HBsAg陽(yáng)性孕婦及其新生兒外周血,共70對(duì).根據(jù)新生兒發(fā)生宮內(nèi)感染與否,將其母親分為宮內(nèi)感染組織和未感染組.同時(shí)還收集到1

2、例孕中期限引產(chǎn)的HBsAg陽(yáng)性孕婦血清和引產(chǎn)胎兒肝臟.②提取血清中HBV DNA,擴(kuò)增宮內(nèi)感染組4對(duì)母嬰和未感染組5例母親HBV2.5kb或1.2kb基因片斷,PCR 產(chǎn)物純化后克隆入Puc19載體,經(jīng)PCR、酶切和測(cè)序鑒定,共得到63株HBV序列.③采用Megalign軟件對(duì)全部HBV株前C/C基因前S/S基因序列進(jìn)行分析,確定基因亞型和血清亞型,構(gòu)建種系進(jìn)化樹(shù),比較各基因區(qū)的差異性.④比較發(fā)生宮內(nèi)感染的4對(duì)母嬰HBV序列間基因位點(diǎn)的

3、不同,基因差異性的高低以及種系進(jìn)化關(guān)系.⑤分別比較宮內(nèi)感染組新生兒和未感染組母親、宮內(nèi)感染組母親和未感染組母親之間核苷酸序列、氨基酸序列的羞異.⑥護(hù)增引產(chǎn)孕婦HBV2.5kb基因片斷和引產(chǎn)胎肝中HBV S區(qū)500bp基因片斷,克隆后各選取一株母胎序列進(jìn)行相似性分析,產(chǎn)同其它序列的變異位點(diǎn)進(jìn)行比較.結(jié)論:①母體內(nèi)的優(yōu)勢(shì)株和弱勢(shì)株都可以通過(guò)宮內(nèi)傳播感染新生兒,可能是單株感染也可能是混合感染.母體的優(yōu)勢(shì)株和新生兒體內(nèi)的優(yōu)勢(shì)株不一定相同.提示H