乙型肝炎病毒前S-S表位變異與肝炎活動的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　通過研究慢性乙型肝炎患者HBV前S/S相關(guān)T細(xì)胞表位變異，并結(jié)合表位所對應(yīng)的患者 HLA-A2分型，探討前 S/S表位變異與肝炎活動的關(guān)系，進(jìn)一步探討慢性乙型肝炎的發(fā)病機制。
　　方法：
　　分別提取30例慢性乙型肝炎中重度患者及35例慢性乙型肝炎輕度患者的血清HBV DNA，PCR擴(kuò)增前S/S基因，所得的PCR陽性產(chǎn)物測序并進(jìn)行基因型分析、檢測T細(xì)胞相關(guān)表位變異情況，并對兩組資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；再分別從其

2、外周血中提取基因組DNA，PCR擴(kuò)增HLA-A基因，后采用巢式PCR分別擴(kuò)增HLA-A基因的5’端和3’端，如出現(xiàn)陽性結(jié)果，則將后兩對引物的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序并進(jìn)行分析，確定是否HLA-A2基因，最后利用統(tǒng)計學(xué)方法比較兩組數(shù)據(jù)中HLA-A2基因陽性的患者T細(xì)胞表位變異情況。
　　結(jié)果：
　　慢性乙型肝炎中重度組有效樣本26例(前S/S基因PCR擴(kuò)增不成功4例)，慢性乙型肝炎輕度組有效樣本33例(前S/S基因PCR擴(kuò)增不成功2

3、例)。
　　1.臨床資料對比：慢性乙型肝炎中重度患者和慢性乙型肝炎輕度患者相比，在兩組間性別和年齡分布均無統(tǒng)計學(xué)差異。HBV DNA定量在兩組間無明顯差異（6.22±1.52VS．5.87±1.45；P=0.373）。在慢性乙型肝炎中重度組，反應(yīng)肝炎活動情況的指標(biāo)ALT（629.08±718.73 VS．63.06±40.63；P<0．001）、AST（302.69±278.07 VS．64.22±27.2；P<0．001）、TB

4、（117.98±141.72 VS．22.43±11.72；P=0.002）均升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.乙肝病毒基因型對比：慢性乙型肝炎中重度組中全為B和C基因型，其中B基因型18例，C基因型8例。慢性乙型肝炎輕度組中也全為B和C基因型，其中B基因型23例，C基因型10例。經(jīng)卡方檢驗后（69.23％VS．69.7%；P=0.969），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.前S/S區(qū)T細(xì)胞表位變異：經(jīng)測序比對分析后發(fā)現(xiàn)有7個前

5、S/S區(qū)T細(xì)胞表位存在高變異率，而僅有表位S.AA183-191 FLLTRILTI有明顯差異（14/26，53.8%V S.7/33，21.2%；P=0.009），另外表位S.AA177-185 VLQAGFFLL的變異率也明顯升高（12/26，46.2%VS.8/33，24.2%；P=0.078）。其余五個表位突變無明顯差異，分別為：前S1.AA10-17（26.9%VS.24.2%；P=0.814）、前S2.AA109-123（5

6、0%V S.57.6%；P=0.562）、前S2.AA152-161（46.2%V S.30.3%； P=0.211）、S.AA204-212（46.2%VS.27.3%； P=0.133）和HBs.AA370-379（38.5%V S.36.4%；P=0.869）。
　　本研究發(fā)現(xiàn)中國S.AA183-191表位的氨基酸序列：B基因型發(fā)生了187R→K突變，即FLLTKILTI，C基因型為FLLTRILTI。發(fā)現(xiàn)存在一個高突變位點

7、：17例發(fā)生184L→S突變，除此之外，還有2例188I→V突變，1例190T→I突變，3例C基因型發(fā)生187R→K的突變，以及1例B基因型發(fā)生187K→R的突變。
　　S.AA177-185 VLQAGFFLL表位發(fā)現(xiàn)與S.AA183-191表位有同一個高突變位點：17例發(fā)生184L→S突變，除此之外，還有2例177V→A突變，1例182 F→V突變，1例180A→V突變。
　　4.HLA-A2陽性患者中前S/S區(qū)T細(xì)胞表

8、位變異：經(jīng)HLA分型后，慢性乙型肝炎中重度組HLA-A2陽性的有14例，慢性乙型肝炎輕度組HLA-A2陽性的有17例。分析后發(fā)現(xiàn)前S/S區(qū)HLA-A2限制性T細(xì)胞表位中有5個有高突變率，但僅S.AA183-191 FLLTRILTI表位有明顯差異（9/26，34.6%VS.4/33，12.1%；P=0.038）表位仍有明顯差異，S.AA177-185 VLQAGFFLL表位變異率也明顯升高（8/26，30.77%VS.4/33，12.1

9、%；P=0.077）。其余3個無明顯差異，分別為：前S2.AA152-161（30.77%VS.18.18%；P=0.259）、S.AA204-212（30.77%VS.24.24%；P=0.576）和HBs.AA370-379（15.38%VS.24.24%；P=0.869）。
　　經(jīng)Bioedit軟件分析后，HLA-A2陽性的患者，S.AA183-191 FLLTRILTI表位突變有一個高突變位點：12例發(fā)生184L→S突變（

10、20.34%），除此之外，還有2例188I→V突變，1例190T→I突變。S.AA177-185表位發(fā)現(xiàn)只有一個高突變位點，且與表位 S.AA183-191的高突變位點一致：12例發(fā)生184L→S突變（20.34%）。
　　結(jié)論：
　　1.廣東部分地區(qū)HBV患者主要基因型為B和C型，未發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者肝炎活動程度與HBV基因型相關(guān)；
　　2.前S/S區(qū)S.AA183-191表位的氨基酸序列有著國內(nèi)外差異，國外文獻(xiàn)報

11、道的序列為FLLTRILTI，中國的B基因型發(fā)生了187R→K突變，即FLLTKILTI；而C基因型未發(fā)生突變，仍為FLLTRILTI。
　　3.在慢性乙型肝炎中重度組，前S/S區(qū)T細(xì)胞表位變異中發(fā)現(xiàn)了S.AA183-191 FLLTRILTI和S.AA177-185表位的高變異率，且存在同一個具有明顯的差異的高突變位點：184L→S，結(jié)合 HLA-A2陽性結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)20.34%的患者為184S突變體，且在中重度肝炎患者中有高