番茄紅素對活性氧族介導(dǎo)的破骨細(xì)胞骨吸收功能的影響.pdf

1、目的:有研究表明破骨細(xì)胞能夠產(chǎn)生活性氧族來促進(jìn)骨的吸收。本課題將研究抗氧化劑番茄紅素是否可以通過抑制破骨細(xì)胞產(chǎn)生活性氧族來抑制其骨吸收功能，從而為骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)理和防治提供一定的科學(xué)依據(jù)。 方法:用直接分離培養(yǎng)出生24小時(shí)內(nèi)的Wistar大鼠破骨細(xì)胞的方法培養(yǎng)破骨細(xì)胞。把這些細(xì)胞植入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(孔內(nèi)預(yù)置蓋玻片或骨片)，隨機(jī)分為A、B、C、D、E五組，分別用含有不同濃度番茄紅素或維生素C的a-MEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。每天在倒

2、置顯微鏡下觀察培養(yǎng)中的破骨細(xì)胞的形態(tài)并計(jì)數(shù)。分別在第2、4、6天取出部分細(xì)胞玻璃爬片，根據(jù)試劑盒說明進(jìn)行TRAP染色。第6天將部分孔中的培養(yǎng)液吸出后分別進(jìn)行細(xì)胞玻璃爬片或骨片的四唑氮藍(lán)染色。第7天取出骨片進(jìn)行掃描電鏡照像。對掃描電鏡圖像用image-pro plus5.0圖像分析軟件分析骨吸收陷窩的數(shù)目和面積。 結(jié)果: (1)培養(yǎng)30分鐘后破骨細(xì)胞即可貼壁，整個(gè)培養(yǎng)過程中在倒置顯微鏡下觀察各組破骨細(xì)胞形態(tài)無明顯差異；各組

3、間相同時(shí)間的破骨細(xì)胞數(shù)差別無顯著性意義(P>0.05)，各組內(nèi)不同時(shí)間破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果差別也無顯著性意義(P>0.05)。 (2)TRAP染色陽性多核細(xì)胞鏡下胞漿酸性磷酸酶活性部位呈紫紅色，細(xì)胞核染色陰性或淡染，偽足清晰。各組不同時(shí)間點(diǎn)TRAP+細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示：各組間相同時(shí)間點(diǎn)TRAP+細(xì)胞個(gè)數(shù)差別無顯著性意義(P>0.05)，各組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)TRAP+細(xì)胞個(gè)數(shù)差別也沒有顯著性意義(P>0.05)。 (3)四唑氮藍(lán)能被

4、活性氧族分解為紫色的甲月替，可作為反映細(xì)胞內(nèi)活性氧族水平的指標(biāo)。四唑氮藍(lán)染色結(jié)果提示：10<'-5>mol/L的番茄紅素明顯抑制了破骨細(xì)胞產(chǎn)生ROS的能力。 (4)掃描電鏡結(jié)果顯示：破骨細(xì)胞在骨片上形成形態(tài)不一的骨陷凹，可見10<'-7>mol/L，的番茄紅素部分抑制了骨吸收陷凹面積的增加，而10<'-5>mol/L的番茄紅素則幾乎完全抑制了骨吸收陷凹的形成。image-pro plus5.0計(jì)算的各組骨吸收陷凹的平均面積顯示B