人剪切修復(fù)基因XPD對人肝癌細(xì)胞中Ets-1和Cdk6基因的調(diào)控作用.pdf

1、目的:研究野生型XPD基因轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞SMMC-7721后，細(xì)胞內(nèi)XPD、Ets-1和Cdk6基因的表達(dá)情況以及對SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖的影響。
　　方法:應(yīng)用瞬時轉(zhuǎn)染法將人工合成的pEGFP-N2-XPD重組質(zhì)粒通過Lipofectamine2000TM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入SMMC-7721細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒細(xì)胞 SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD組、轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒細(xì)胞SMMC-7721-pEGFP-N2組、

2、脂質(zhì)體組、空白對照組，共四組。用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測四組細(xì)胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因的mRNA表達(dá)量，蛋白印跡法(Western blot)檢測四組細(xì)胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因的蛋白質(zhì)表達(dá)情況，并用流式細(xì)胞儀和四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)分別檢測四組細(xì)胞周期變化和細(xì)胞的增殖活力。
　　結(jié)果:四組細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染XPD的細(xì)胞組中，XPD的mRNA和蛋白表達(dá)明顯增高(P＜0.01)，Ets