睪丸扭轉(zhuǎn)術(shù)中應(yīng)用彩色多普勒和超聲造影評價睪丸活力.pdf

1、目的： 探討在睪丸扭轉(zhuǎn)術(shù)中應(yīng)用彩色多普勒(CDU Color Doppler Ultrasonography)和超聲造影(CEUS Contrast-Enhanced Ultrasonography)判斷缺血睪丸活力的價值。 方法： 1.動物模型制作 選取56只體重約2.0-2.5kg健康雄性新西蘭大白兔，隨機(jī)分7組，進(jìn)行動物實驗：(1)正常對照組(n=8)，(2)假手術(shù)組(n=8)，(3)0.5h組(n

2、=8)，(4)1.5h組(n=8)，(5)3h組(n=8)，(6)6h組(n=8)，(7)12h組(n=8)。采用水合氯醛灌腸和戊巴比妥靜注聯(lián)合麻醉，正常對照組不作任何手術(shù)處理；假手術(shù)組無菌條件下在距左側(cè)陰囊上方1cm處，將皮膚切開，鈍性分離并游離精索，暴露精索10min后，切口關(guān)閉縫合；0.5h，1.5h，3h，6h，和12h組分別游離精索后，用動脈夾將精索完全夾閉，彩色多普勒顯示左側(cè)睪丸無血流信號，然后將切口縫合，夾閉精索連同動脈夾

3、埋置皮下，分別計時0.5h，1.5h，3h，6h，和12h，制成5組左側(cè)睪丸缺血(扭轉(zhuǎn))模型。CDU及CEUS檢查時，戊巴比妥耳緣靜脈注射麻醉，彩超檢測睪丸內(nèi)無血流信號，證實缺血模型制作成功，剪開縫線，將動脈夾移除，溫生理鹽水紗布濕敷10min后，依次行CDU、CEUS檢查及睪丸出血試驗(TBT Testicular Bleeding Test)。 2.CDU、CEUS 使用GE Vivid7彩超儀，9L變頻線陣淺表探頭

4、，分別觀察并記錄雙側(cè)睪丸的形態(tài)，實質(zhì)回聲，取睪丸最大縱切面，測量睪丸的上下徑(A)、前后徑(B)及左右徑(C)，計算睪丸體積V=A*B℃*π/4*0.9；觀察并記錄雙側(cè)睪丸實質(zhì)及包膜血流信號(連續(xù)觀察取睪丸血流顯示最豐富的一幅記錄保存)，分別計算左右睪丸彩色血流顯示面積百分比r(r=血流顯示面積/睪丸最大縱切面面積)，并計算左右睪丸彩色血流顯示面積百分率之比R(R=r左/r右)。 儀器調(diào)至小血管造影模式，造影參數(shù)頻率3.2/6.

5、4MHz，MI0.10，TIs0.0。探頭垂直固定于左側(cè)睪丸的最大縱切面，經(jīng)兔耳緣靜脈快速團(tuán)注SonoVue，劑量0.2ml/kg，緊接1ml生理鹽水快速注射。團(tuán)注造影劑同時啟動超聲儀器內(nèi)置計時器，觀察并存儲睪丸造影灌注圖像。灌注結(jié)果按照完全均勻灌注、完全不均勻灌注、灌注缺損和無灌注進(jìn)行分類：完全均勻灌注，睪丸實質(zhì)內(nèi)造影劑彌漫性充填，回聲分布均勻；完全不均勻灌注，睪丸實質(zhì)內(nèi)造影劑彌漫性充填，回聲分布不均勻；灌注缺損，睪丸實質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)局部沒

6、有灌注的區(qū)域；無灌注，睪丸實質(zhì)內(nèi)完全沒有造影劑的灌注。選取整個睪丸縱切面為感興趣區(qū)，繪制時間-強(qiáng)度曲線(TICs Time-Intensity Curves)，對灌注參數(shù)到達(dá)時間(AT Ariving Time)、達(dá)峰時間(TTP Time to Peak intensity)和峰值增強(qiáng)值(⊿PI Peak Intensity)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 3.睪丸出血試驗和睪丸病理形態(tài)學(xué)及超微細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察 各實驗組睪丸造影后，陰囊

7、皮膚縱行切開，打開鞘膜腔，在睪丸白膜作長約5mm，深達(dá)睪丸髓質(zhì)楔形切口，觀察創(chuàng)口10分鐘內(nèi)是否有充分出血。按照Arda出血試驗分級標(biāo)準(zhǔn)，將觀察結(jié)果分為3級：Ⅰ級，充分出血，即在切取活體標(biāo)本時創(chuàng)口出血或滲血；Ⅱ級，不充分出血，即睪丸被切開后并無立即出血，但在10分鐘以內(nèi)開始出血；Ⅲ級，不出血，即在10分鐘之內(nèi)無出血或滲血。 觀察并記錄缺血睪丸溫鹽水濕敷前后的大體外觀顏色變化；取各組左側(cè)睪丸組織常規(guī)制作HE染色光鏡及透視電鏡標(biāo)本，倒

8、置顯微鏡和透視電鏡對睪丸組織病理及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。 4.數(shù)據(jù)收集及統(tǒng)計學(xué)分析 實驗保存的所有灰階圖像及超聲造影圖像均由兩名高年資超聲醫(yī)師評價，包括二維灰階回聲的均勻性以及造影圖像的分類，其中造影結(jié)果評價后分為4類：完全均勻灌注，完全不均勻灌注，灌注缺損及無灌注。左右睪丸血流顯示面積及睪丸切面面積均采用Image-Pro Plus5.0專業(yè)計算機(jī)圖像處理軟件測量，重復(fù)測量3次取平均值。采用SAS V8.1統(tǒng)計軟件包進(jìn)

9、行統(tǒng)計學(xué)分析，根據(jù)采集數(shù)據(jù)采用配對資料兩樣本均數(shù)比較的t檢驗，完全隨機(jī)設(shè)計資料的非參數(shù)統(tǒng)計(Kruskal-Wallis H)，完全隨機(jī)設(shè)計資料的方差分析及雙向有序資料的x2檢驗，計量數(shù)據(jù)結(jié)果用算術(shù)均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。 結(jié)果： 1.動物模型制作 5組兔睪丸缺血模型通過動脈夾將左側(cè)精索完全夾閉，彩超檢測睪丸內(nèi)無血流供應(yīng)，動脈夾移除前彩色多普勒再次檢測睪丸內(nèi)均無血流信號，證實模型制作成功，本實驗睪丸缺血模型制

10、作成功率100％(40/40)。 2.CDU、CEUS 正常組左側(cè)睪丸體積大小為0.62±0.102(mm3)，假手術(shù)組左側(cè)睪丸體積大小為0.63±0.069(mm3)，組內(nèi)比較兩組均無顯著差異(P=0.251和0.381>0.05)，各缺血組左側(cè)睪丸體積較右側(cè)明顯增大，0.5h、1.5h、3h、6h和12h組左側(cè)睪丸體積大小分別為1.09±0.184(mm3)、1.23±0.099(mm3)、1.28±0.280(mm

11、3)、1.12±0.092(mm3)和1.14±0.141(mm3)，組內(nèi)比較差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(各組P<0.0001)，正常組、假手術(shù)組、0.5h組和1.5h組睪丸呈均勻細(xì)小等回聲，3h組、6h組和12h組睪丸回聲不均勻，局部出現(xiàn)低回聲，隨缺血時間延長，低回聲范圍逐漸擴(kuò)大；正常組及對照組左右睪丸血流顯示面積百分率比值R比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，R值分別為1.00±0.185、1.04±0.196，0.5h、1.5h、3h、6h和12h

12、組R值分別為1.57±0.193、1.67±0.175、0.74±0.267、0.54±0.100和0，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=110.22，P<0.0001，SNK法兩兩比較)。 實驗組0.5h及1.5h組各8例均為完全均勻灌注，與正常對照組及假手術(shù)組灌注模式相同，3h組8例均為完全不均勻灌注，6h組7例為灌注缺損，1例無灌注，12h組8例全部為無灌注，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(x2=43.0487，P<0.0001)。TICs

13、分析結(jié)果：正常對照組、假手術(shù)組、0.5h、1.5h、3h和6h組AT值分別為4.1±0.83(s)、4.5±0.76(s)、6.3±1.04(s)、8.3±2.12(s)、12.1±3.91(s)和20.7±6.32(s)(x2=50.0846，P<0.0001)；PPT分別為9.5±0.76(s)、10.4±1.41(s)、14.3±2.76(s)、22.4±3.96(s)、36.8±4.40(s)、50.0±3.11(s)(x2=5

14、2.7090，P<0.0001)；⊿PI分別為4.1±0.83(dB)、7.5±1.27(dB)、7.5±1.26(dB)，4.9±0.90(dB)、3.9±0.65(dB)和1.81±0.88(dB)(F=83.73，P<0.0001)，12h組8例均為無灌注，⊿PI降為0(dB)。 3.睪丸出血試驗、大體及光鏡病理和超微細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)觀察 按照Arda等三級評分標(biāo)準(zhǔn)對睪丸出血試驗結(jié)果進(jìn)行分級：正常對照組、假手術(shù)組、0

15、.5h組、1.5h組各8例均為Ⅰ級，3h組8例均為Ⅱ級，6h組4例為Ⅱ級，4例為Ⅲ級，12h組2例為Ⅱ級，6例為Ⅲ級(x2=42.6357，P<0.0001)。 正常對照組和假手術(shù)組睪丸均呈卵圓形，色澤粉紅，睪丸包膜表面及引帶可見豐富小血管。切開白膜達(dá)深部髓質(zhì)，可見粉紅的活動性出血。各缺血組睪丸體積增大，失去正常形態(tài)，呈彎鉤狀或球形，顏色發(fā)黑。0.5h組和1.5h組溫敷后顏色轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色；3h組和6h組溫敷后顏色逐漸由暗黑色轉(zhuǎn)為

16、暗紅色；12h組睪丸外觀顏色發(fā)黑，溫敷后顏色未變化。 正常對照組、假手術(shù)組、0.5h和1.5h組光鏡睪丸生精小管上皮及間質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化輕微甚至無改變，間質(zhì)血管輕度充血，電鏡觀察滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，線粒體輕度水腫或無變化；3h組光鏡下部分小管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，間質(zhì)明顯充血，部分紅細(xì)胞溢出小血管，電鏡觀察細(xì)胞核染色質(zhì)呈顆粒狀聚集，并可見染色質(zhì)邊集，間質(zhì)小血管內(nèi)可見血小板粘附、聚集；6h組光鏡下小管上皮大部脫落，部分與基膜完全分離，管腔閉