石斛生物總堿對缺氧缺糖致原代皮質(zhì)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的；從細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平研究石斛生物總堿對缺氧缺糖所致原代培養(yǎng)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及其機制，探討石斛生物總堿對腦缺血再灌損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用，為腦缺血再灌損傷的治療提供一種新的有效的神經(jīng)保護(hù)劑。 方法；以乳鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元為研究對象，原代培養(yǎng)至第9天以低糖結(jié)合物理性缺氧(95％N2+5％CO2)模擬體內(nèi)缺血性損傷，以復(fù)氧和復(fù)糖模擬再灌注損傷。設(shè)置空白組、模型組、溶媒組、石斛生物總堿高、中、低劑量組和陽性對照組。分別在缺氧缺

2、糖(1h、2h、4h)和缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖(3h、12h、24h)等不同時點通過MTT檢測細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測細(xì)胞損傷程度、細(xì)胞凋亡率、線粒體膜電位(MMP)、細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度及光鏡和透視電鏡觀察病理形態(tài)學(xué)的變化來評價石斛生物總堿對腦缺血再灌損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用；并運用實時定量多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測凋亡相關(guān)基因caspase-3、caspase-12的表達(dá)以探討相關(guān)作用機制。 結(jié)果；1.

3、缺氧損傷后MTT吸光度值明顯下降：各模型組與同時點空白組吸光度值比較均有顯著性差異(P＜0.01)；缺氧缺糖1h、2h各劑量組、缺氧4h高劑量組可提高M(jìn)TT吸光度值，與同時點模型組比較均有差異(P＜0.05)；缺氧2h/復(fù)氧3h各劑量組、缺氧2h/復(fù)氧12h中、高劑量組、缺氧2h/復(fù)氧24h高劑量組可提高M(jìn)TT吸光度值，與同時點模型組比較均有差異；2.缺氧損傷后LDH漏出率明顯升高：各模型組與同時點空白組比較均有顯著性差異(P＜0.01

4、)；缺氧1h中、高劑量組、缺氧2h各劑量組、缺氧4h高劑量組可降低LDH漏出率；缺氧2h/復(fù)氧3h中、高劑量組、缺氧2h/復(fù)氧12h中、高劑量組、缺氧2h/復(fù)氧24h高劑量組使LDH漏出率下降，與同時點模型組比較均有差異(P＜0.05)；3.缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡率顯著升高：模型組與空白組比較有顯著性差異(P＜0.01)；石斛生物總堿各劑量組均可降低細(xì)胞凋亡率，與模型組比較有差異(P＜0.05或0.01)；4.缺

5、氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度均顯著升高：模型組與空白組比較有顯著性差異(P＜0.01)；各劑量組可降低細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)；5.缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后MMP顯著下降：模型組與空白組比較有顯著性差異(P＜0.01)；石斛生物總堿各劑量組使MMP升高，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)；6.缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后caspase-3和cas

6、pase-12表達(dá)顯著升高：模型組細(xì)胞與空白組比較有顯著性差異(P＜0.01)；石斛生物總堿各劑量組均可降低caspase-3和caspase-12的表達(dá)，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)；7.形態(tài)學(xué)觀察：缺氧損傷后細(xì)胞失去折光性，胞體輪廓模糊，突起減少或回縮、斷裂，HE檢測發(fā)現(xiàn)模型組細(xì)胞還有核固縮、濃染等現(xiàn)象，電鏡微觀結(jié)構(gòu)觀察線粒體腫脹，嵴斷裂、模糊；石斛生物總堿組損傷比模型組明顯減輕。 結(jié)論：石斛生物總堿能明顯減輕缺