石斛生物總堿對(duì)缺氧缺糖致原代皮質(zhì)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用.pdf_第1頁(yè)
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1、目的;從細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平研究石斛生物總堿對(duì)缺氧缺糖所致原代培養(yǎng)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,探討石斛生物總堿對(duì)腦缺血再灌損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用,為腦缺血再灌損傷的治療提供一種新的有效的神經(jīng)保護(hù)劑。 方法;以乳鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元為研究對(duì)象,原代培養(yǎng)至第9天以低糖結(jié)合物理性缺氧(95%N2+5%CO2)模擬體內(nèi)缺血性損傷,以復(fù)氧和復(fù)糖模擬再灌注損傷。設(shè)置空白組、模型組、溶媒組、石斛生物總堿高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組。分別在缺氧缺

2、糖(1h、2h、4h)和缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖(3h、12h、24h)等不同時(shí)點(diǎn)通過(guò)MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測(cè)細(xì)胞損傷程度、細(xì)胞凋亡率、線(xiàn)粒體膜電位(MMP)、細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度及光鏡和透視電鏡觀察病理形態(tài)學(xué)的變化來(lái)評(píng)價(jià)石斛生物總堿對(duì)腦缺血再灌損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用;并運(yùn)用實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因caspase-3、caspase-12的表達(dá)以探討相關(guān)作用機(jī)制。 結(jié)果;1.

3、缺氧損傷后MTT吸光度值明顯下降:各模型組與同時(shí)點(diǎn)空白組吸光度值比較均有顯著性差異(P<0.01);缺氧缺糖1h、2h各劑量組、缺氧4h高劑量組可提高M(jìn)TT吸光度值,與同時(shí)點(diǎn)模型組比較均有差異(P<0.05);缺氧2h/復(fù)氧3h各劑量組、缺氧2h/復(fù)氧12h中、高劑量組、缺氧2h/復(fù)氧24h高劑量組可提高M(jìn)TT吸光度值,與同時(shí)點(diǎn)模型組比較均有差異;2.缺氧損傷后LDH漏出率明顯升高:各模型組與同時(shí)點(diǎn)空白組比較均有顯著性差異(P<0.01

4、);缺氧1h中、高劑量組、缺氧2h各劑量組、缺氧4h高劑量組可降低LDH漏出率;缺氧2h/復(fù)氧3h中、高劑量組、缺氧2h/復(fù)氧12h中、高劑量組、缺氧2h/復(fù)氧24h高劑量組使LDH漏出率下降,與同時(shí)點(diǎn)模型組比較均有差異(P<0.05);3.缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡率顯著升高:模型組與空白組比較有顯著性差異(P<0.01);石斛生物總堿各劑量組均可降低細(xì)胞凋亡率,與模型組比較有差異(P<0.05或0.01);4.缺

5、氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度均顯著升高:模型組與空白組比較有顯著性差異(P<0.01);各劑量組可降低細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度,與模型組比較均有顯著性差異(P<0.01);5.缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后MMP顯著下降:模型組與空白組比較有顯著性差異(P<0.01);石斛生物總堿各劑量組使MMP升高,與模型組比較均有顯著性差異(P<0.01);6.缺氧缺糖2h/復(fù)氧復(fù)糖12h損傷后caspase-3和cas

6、pase-12表達(dá)顯著升高:模型組細(xì)胞與空白組比較有顯著性差異(P<0.01);石斛生物總堿各劑量組均可降低caspase-3和caspase-12的表達(dá),與模型組比較有顯著性差異(P<0.01);7.形態(tài)學(xué)觀察:缺氧損傷后細(xì)胞失去折光性,胞體輪廓模糊,突起減少或回縮、斷裂,HE檢測(cè)發(fā)現(xiàn)模型組細(xì)胞還有核固縮、濃染等現(xiàn)象,電鏡微觀結(jié)構(gòu)觀察線(xiàn)粒體腫脹,嵴斷裂、模糊;石斛生物總堿組損傷比模型組明顯減輕。 結(jié)論:石斛生物總堿能明顯減輕缺

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